| 研究課題/領域番号 |
24590286
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 東京医科大学 |
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研究代表者 |
秦 喜久美 東京医科大学, 医学部, 助教 (30287156)
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| 研究分担者 |
高田 栄子 東京医科大学, 医学部, 講師 (50110903)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 国際情報交換 |
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| 研究概要 |
B細胞特異的にPRMT1を欠損したマウスを作成するために、PRMT1(flox/flox)マウスとCD19(cre/cre)マウスを掛合わせ、さらにその子を掛合わせることにより、PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスを作成した。B細胞特異的にPRMT1が欠損していることを確認するため、PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスからspleenを摘出し、spleenからautoMACSを使用してB細胞とnon-B細胞に分離し、各細胞から細胞抽出液を調製しウエスタン法によってPRMT1の発現を確認した。その結果genotype通りにPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウス由来のB細胞のみPRMT1の発現が欠損していた。
次に、PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウス内でのリンパ球のsubpopulationを解析したところ、PRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスでは、pre-B細胞以後の各分化段階のB細胞の数はPRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスに比べると有意に減少していた。T細胞に関しては有意な差はなかった。
PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスの血清中のイムノグロブリン濃度をELISA法にて測定したところ、IgM、IgGa、IgG2bとIgG3の濃度は有意に減少していたが、IgAとIgG2aについては有意さは認められなかった。
以上結果から、PRMT1はB細胞分化に重要な働きをしていることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成24年度の研究計画通りに、PRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスを作成、B細胞特異的にPRMT1タンパク質の発現が減少していることを確認、各イムノグロブリン濃度の測定、B細胞亜集団の動態を測定したが、in vivoでの免疫応答についてはまだ着手できてないので、おおむね順調に進展していると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスの免疫応答の違いをみるため、NP-OVA/Alum、NP-FicollまたはNP-LPSでそれぞれ免疫し、NP特異的抗体の産生をELISA法にて測定する。
PRMT1(flox/flox)CD19(+/+)マウスとPRMT1(flox/flox)CD19(cre/+)マウスからsplenic B細胞を調製し、in vitroで刺激後、activation markerの発現、カルシウムの取り込み、分裂回数、増殖能、class switch recombination等を観察する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
実験用マウスは間約150匹使用予定であり、マウスの購入及び飼育代として約80万円。細胞培養等に必要な実験用器具類(チップ、チューブ、培養フラスコ等)として約20万円。細胞分布の測定に必要な蛍光抗体、細胞表面抗原の刺激に必要な抗体、各種細胞株の作成に必要な酵素類等一般試薬•酵素類として約40万円。学会参加費として約5万円、をそれぞれ使用する予定である。
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