子宮頸癌の放射線治療効果予測における病理医の早期介入：治療早期の上皮間葉移行評価

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24590406
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 谷野 美智枝 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90360908)
• 研究分担者: 渡利 英道 北海道大学, 大学病院, 講師 (10344508) ; 田中 伸哉 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70261287) ; 木下 留美子 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (70507582)
• キーワード: 子宮頸癌 / 放射線 / 上皮間葉移行

研究概要

個々の腫瘍の性質に応じた個別化診断、それに基づく分子標的治療が施行され、肺腺癌や大腸癌などに対する分子標的治療は、その高い奏功率と副作用が少ない薬剤として、患者さんのQOL及び延命に多大な役割を果たしている。一方、放射線治療においては個々の腫瘍の性質を考慮せず一律な照射が行われており多くの子宮頚癌に有効であるが、一部の癌では、治療後の耐性獲得や悪性形質への変化により早い時期での転移巣の形成などが起きること、実験レベルでは放射線照射後の上皮間葉移行(epithelial-mesenchymal transition: EMT)を介した悪性形質への転換も報告されている。
今回我々は、子宮頚癌を対象に患者検体を用いた免疫染色、細胞株を用いた遺伝子変異の解析などによる腫瘍性質の評価放射線治療効果予測、治療への積極的な貢献を目指すことを目的に昨年度に続き以下の検討を行った。４種類の子宮頸癌細胞株(Caski, C33A, SiHa, Hela)を用いて放射線照射(10Gyx1, 2Gyx10)を行いその早期（48時間後）及び再増殖期（21日後）のEMT関連蛋白の発現をreal time PCR法やwestern blotting法を用いて調べた。C33AとCaskiは照射に反応しいずれの放射線照射法においても50%以上の細胞が死に至ったが、SiHaとHelaは放射線照射抵抗性で同じ線量では50%以上の細胞が生き残った。また、C33AとCaskiの放射線照射後再増殖期の細胞ではMMP-2, 9の発現や酵素活性、運動能の亢進を認めた。また、cDNA マイクロアレイ解析結果から、C33Aでは照射早期と細胞増殖期でいずれも照射前に比較して2倍以上の遺伝子発現を認めるものが9個同定された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

細胞株を用いたin vitroの実験系では放射線感受性の細胞株と耐性の細胞株が存在し、感受性細胞でも再増殖期にはEMT関連蛋白の発現やその運動能が亢進していることがわかった。現在、EMT関連転写因子のひとつをノックダウンすることによってそれらの表現型への影響を解析中である。
免疫染色学的解析では、子宮頸癌の診断時と再発して多発転移から死亡された剖検検体が6症例集まり初診時及び再発転移時それぞれの検体に関してEMT関連蛋白の発現を中心とした蛋白発現プロファイルを検討中である。
in vivoの系での検討が未着手であり、早急に検討を進める。

今後の研究の推進方策

in vitroの検討と並行してin vivoの転移実験を行う。 in vitroの検討で確認されたC33Aの放射線治療後の悪性表現型を示した細胞と放射線照射を行っていないC33Aを用いて、ヌードマウスの尾静脈投与を行い肺転移の個数を評価する。免疫染色を行う対象症例を10症例程度に増やすため関連病院などへの協力を仰ぐ予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Sustained elevation of Snail promotes Glial-Mesenchymal Transition (GMT) after irradiation in malignant glioma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mahabir R, Tanino M, Elimansuri, Wang L, Kimura T, Itoh T, Ohba Y, Nishihara H, Shirato H, Tsuda M, Tanaka S
  • 雑誌名: Neuro-Oncology 巻: 16 ページ: 671-685
  • DOI: 10.1093/neuonc/not239
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] IDH1 mutation as a potential novel biomarker for distinguishing pseudoprogression from true progression in patients with glioblastoma treated with temozolomide and radiotherapy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Motegi H, Kamoshima Y, Terasaka S, Kobayashi H, Yamaguchi S, Tanino M, Murata J, Houkin K
  • 雑誌名: Brain Tumor Pathol 巻: 30 ページ: 67-72
  • DOI: 10.1007/s10014-012-0109-x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of EphA2-mediated tyrosine phosphorylation of Shp2 in Shp2-regulated activation of extracellular signal-regulated kinase. (2013)
  • 著者名/発表者名: Miura K, Wakayama Y, Tanino M, Orba Y, Sawa H, Hatakeyama M, Tanaka S, Sabe H, Mochizuki N
  • 雑誌名: Oncogene 巻: 32 ページ: 5292-301
  • DOI: 10.1038/onc.2012.571.
  • 査読あり
• [雑誌論文] NS1-binding protein abrogates the elevation of cell viability by the influenza A virus NS1 protein in association with CRKL. (2013)
  • 著者名/発表者名: Miyazaki M, Nishihara H, Hasegawa H, Tashiro M, Wang L, Kimura T, Tanino M, Tsuda M, Tanaka S.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 441 ページ: 953-7
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.11.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Co-Overexpression of GEP100 and AMAP1 Proteins Correlates with Rapid Local Recurrence after Breast Conservative Therapy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita R, Nam JM, Ito YM, Hatanaka KC, Hashimoto A, Handa H, Otsuka Y, Hashimoto S, Onodera Y, Hosoda M, Onodera S, Shimizu S, Tanaka S, Shirato H, Tanino M, Sabe H.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 ページ: e76791
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0076791
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Fas/FasL pathway impairs the alveolar fluid clearance in mouse lungs. (2013)
  • 著者名/発表者名: Herrero R, Tanino M, Smith LS, Kajikawa O, Wong VA, Mongovin S, Matute-Bello G, Martin TR
  • 雑誌名: Am J Physiol Lung Cell Mol Physio 巻: 305 ページ: L377-88
  • DOI: 10.1152/ajplung.00271.2012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Downregulation of miRNA-31 induces taxane resistance in ovarian cancer cells through increase of receptor tyrosine kinase MET. (2013)
  • 著者名/発表者名: Mitamura T, Watari H, Wang L, Kanno H, Hassan MK, Miyazaki M, Katoh Y, Kimura T, Tanino M, Nishihara H, Tanaka S, Sakuragi N
  • 雑誌名: Oncogenesis 巻: 2 ページ: e40
  • DOI: 10.1038/oncsis.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of CD163 prevents apoptosis through the production of granulocyte colony-stimulating factor in meningioma (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanno H, Nishihara H, Wang L, Yuzawa S, Kobayashi H, Tsuda M, Kimura T, Tanino M, Terasaka S, Tanaka S
  • 雑誌名: Neuro-Oncology 巻: 15 ページ: 853-64
  • DOI: 10.1093/neuonc/not028
  • 査読あり
• [雑誌論文] Relationship between Methyl CpG binding protein 2 and JC viral proteins (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi K, Orba y, Kimura T, Wang L, Kohsaka S, Tsuada M, Tanino M, Nishiha H, Nagashima K, Sawa H, Tanaka S
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis 巻: 66 ページ: 126-132
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intracranial mass-forming lesion associated with dural thickening and hypophysitis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanno H, Tanino M, Watanabe K, Ozaki Y, Itoh T, Kimura T, Nishihara H, Itoh T, Narita T, Nagashima K, Tanaka S.
  • 雑誌名: Neuropathology 巻: 33 ページ: 213-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Broad and heterogeneous vasculopathy in pulmonary fibrosis and emphysema with pulmonary hypertension (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato T, Tsujino I, Tanino M, Ohira H and Nishimura M
  • 雑誌名: Respirology Case Reports 巻: 1 ページ: 10-13
  • 査読あり
• [雑誌論文] Large solid-pseudopapillary neoplasm of the pancreas with aberrant protein expression and mutation of β-catenin: a case report and literature review of the distribution of β-catenin mutation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Ozasa M, Miyashita K, Saga A, Miwa K, Saito M, Morioka M, Takeuchi M, Takenouchi N, Yabiku T, Kanno H, Yuzawa S, Tanino M, Tanaka S, Kawakami H, Asaka M, Sakamoto N
  • 雑誌名: Intern Med 巻: 52 ページ: 2051-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of GSH synthesis potentiates temozolomide-induced bystander effect in glioblastoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kohsaka S, Takahashi K, Wang L, Tanino M, Kimura T, Nishihara H, Tanaka S
  • 雑誌名: Cancer Lett 巻: 331 ページ: 68-75
  • DOI: 10.1016/j.canlet.2012.12.005
  • 査読あり
• [学会発表] Let 7a regulates IL-6 expression in malignant mesothelioma (2013)
  • 著者名/発表者名: Mishie Tanino, Shinji Kohasa, Kazuhiro Yachi, Estuji Marukawa, Masumi Tsuda, Taichi Kimura, Hiroshi Nishihara, Shinya Tanaka
  • 学会等名: 第72回日本癌学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] Let7a regulates IL-6 expression in malignant mesothelioma (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanino M, Kohasaka S, Yachi K, Tsuda M, Kimura T, Nishihara H, Tanaka S.
  • 学会等名: AACR-NCI-EORTC International Conference
  • 発表場所: Hynes convention center (Boston, USA)
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 術中迅速脳腫瘍診断における電解非接触撹拌技術を搭載した迅速免疫染色装置使用の有用性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 谷野美智枝、明坂詩織、石田雄介、木村太一、西原広史、田中伸哉
  • 学会等名: 第102回日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌ロイトンホテル（札幌）
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 術中迅速脳腫瘍診断における電解非接触撹拌技術を搭載した迅速免疫染色装置使用の有用性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 谷野美智枝、明坂詩織、石田雄介、木村太一、西原広史、田中伸哉
  • 学会等名: 第31回日本脳腫瘍病理学会
  • 発表場所: KFC Hall （東京）
  • 年月日: 20130524-20130525
• [備考] 北海道大学医学研究科 腫瘍病理学分野
  • URL: http://patho2sv.med.hokudai.ac.jp/