乳癌におけるミトコンドリアＤＮＡ―Ｄループ領域変異解析を用いた癌細胞系譜の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24590433
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 増田 しのぶ 日本大学, 医学部, 教授 (20276794)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 乳癌 / ミトコンドリアDNA / クロナリティ / 癌細胞系譜

研究実績の概要

本研究は、最終的に乳癌の発生進展過程の解明および治療の適正化に貢献することを目標としている。平成26年度は、遺伝子変異多様性の可視化のために、以下の基礎的検討を行った。
目的：同一細胞における蛋白と遺伝子を同時に可視化するためのプロトコールを確立する。
材料：ヒト乳がん培養細胞株(SK-BR3)を用いたセルブロックのパラフィン包埋切片を用いた。方法：①蛋白の検出には抗HER2抗体を用いた免疫染色を、遺伝子の検出にはHER2 gene probe, CEP17 probeを用いたin situ hybridization法を行った。標識物質は、IHC法にはAlexa Fluor 555を、ISH法にはTexas red (HER2)およびFITC (CEN-17)の蛍光色素を用いた。②IHC法のみ、IHC法後ISH法、ISH法のみの検討を行い、IHC法後ISH法のシグナルの適正性を確認した。③IHC法については、ポリマー標識法とLSAB法とを比較検討した。④ISH法の前処置として酵素処理の必要性の有無について比較検討した。
結果：①蛍光標識によるIHC法後ISH法により、蛋白と遺伝子の同時検出は可能であった。②IHC法については、ポリマー標識法のほうがLSAB法よりも良好なシグナルが得られた。③ISH法の前処置として酵素処理は不要であり、この過程を省略することにより良好なシグラルが得られた。
考察：同一細胞における蛋白と遺伝子を同時に可視化するためのプロトコールが確立されたことで、腫瘍内多様性をより正確かつ詳細に理解することが可能となった。

研究成果

• [雑誌論文] Histopathological characteristics of breast ductal carcinoma in situ and association with imaging findings. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tang X, Yamashita T, Hara M, Kumaki N, Tokuda Y, Masuda S.
  • 雑誌名: Breast Cancer 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: DOI 10.1007/s12282-015-0592-0, 2014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathological examination of breast cancer biomarkers: current status in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda S
  • 雑誌名: Breast Cancer 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: DOI 10.1007/s12282-014-0566-7, 2014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Altered intracellular region of MUC1 and disrupted correlation of polarity-related molecules in breast cancer subtypes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Iizuka M, Nakanishi Y, Fuchinoue F, Maeda T, Murakami E, Obana Y, Enomoto K, Tani M, Sakurai K, Amano S, Masuda S.
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 106 ページ: 307-314
  • DOI: doi:10.1111/cas.12596, 2015.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Overexpression of PGC1α and accumulation of p62 in apocrine carcinoma of the breast. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fuchinoue F, Hirotani Y, Nakanishi Y, Yamaguchi H, Nishimaki H, Noda H, Tang X, Iiuzuka M, Amano S, Sugitani M, Nemoto N, Masuda S.
  • 雑誌名: Patholology International 巻: 65 ページ: 19-26
  • DOI: doi:10.1111/pin.12235, 2014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative Study of the One-step Nucleic Acid Amplification Assay and Conventional Histlogical Examination for the Detection of Breast Cancer Sentinel Lymph Node Metastases. (2014)
  • 著者名/発表者名: Terada M, Niikura N, Tsuda B, Masuda S, Kumaki N, Tang X, Okamura T, Saito Y, Suzuki Y, Tokuda Y.
  • 雑誌名: Tokai Exp Clin Med 巻: 39 ページ: 122-127
  • 査読あり
• [雑誌論文] The cell cycle profiling: Risk score based on CDK1 and 2 predicts early recurrence in node-negative, hormone receptor-positive breast cancer treated with endocrine therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kim SJ, Masuda N, Tsukamoto F, Inaji H, Akiyama F, Sonoo H, Kurebayashi J, Yoshidome K, Tsujimoto M, Takei H, Masuda S, Nakamura S, Noguchi S.
  • 雑誌名: Cancer Letters 巻: 355 ページ: 217-223
  • DOI: doi: 10.1016/j.canlet. 2014.08.042, 2014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interpretation of HER2 tests in gastric cancer: confirmation of interobserver differences and validation of a QA/QC educational program. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kushima R, Kuwata T, Yao T, Kuriki H, Hashizume K, Masuda S, Tuda H, Ochiai A.
  • 雑誌名: Virchows Arch 巻: 464 ページ: 539-545
  • DOI: DOI 10.1007/s00428-014-1567-9,2014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prognostic Significance of the Ki67 Scoring Categories in Breast Cancer Subgroups. (2014)
  • 著者名/発表者名: Niikura N, Masuda S, Kumaki N, Tang X, Terada M, Terao M, Iwamoto T, Oshitanai R, Morioka T, Tuda B, Okamura T, Saito Y, Suzuki Y, Tokuda Y.
  • 雑誌名: Clinical Breast Cancer 巻: 14 ページ: 323-329
  • DOI: doi: 10.1016/j.clbc.2013.12.013.
  • 査読あり