研究課題
前年度は、Mpiと直接的・間接的に結合する13個のタンパク質をin vitro pull-downアッセイによって同定したが、本年度はDNA inversionを起こす 7つの莢膜多糖生合成領域のpromoterに結合するDNA結合タンパク質をDynabeads M-280 streptavidinを使ったDNA affinity precipitation assay (DNAP assay)によって同定を試みた。まず、PS3莢膜生合成領域のpromoter領域をpUC118ベクターにクローニングした後、5’ビオチン化M4およびRVプライマーを用いてPCRを行うことでビオチン化DNAプローブを作製した。ビオチン化DNAプローブ1 μgとB. fragilisの粗抽出液を混合しDynabeads M-280 streptavidinを用いてaffinity回収を行ったが、PS3プロモーター領域に結合するタンパク質は検出されなかった。今後詳細な条件設定が必要である。mpi遺伝子近傍の遺伝子構造は非常にユニークであり、mpi遺伝子の発現はmpi直下に存在するチロシン型部位特異的組換え酵素（BF2766）が制御するDNA逆位によっても調節されていることを今回明らかにした。さらに、BF2766による外膜vesicle (OMV)の産生制御は胆汁の刺激によって増強され、OMV産生増強株におけるOMV内部には莢膜 (PS5)が包埋されていることが推測された。
すべて 2015 2014
すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 3件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (3件)
Biocontrol Science
巻: 20 ページ: 43-51
10.4265/bio.20.43.
New Microbes New Infect.
巻: 2 ページ: 175-176
10.1002/nmi2.64.
J Basic Microbiol.
巻: 54 ページ: 558-567
10.1002/jobm.201200763.
