レドックス生体応答反応を利用した新規のベッドサイド迅速酸化ストレス診断法の開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24590686
• 研究機関: 福井大学
• 研究代表者: 糟野 健司 福井大学, 医学部, 准教授 (60455243)
• 研究分担者: 岩野 正之 福井大学, 医学部, 教授 (20275324) ; 木村 秀樹 福井大学, 医学部附属病院, 准教授 (20283187) ; 高橋 直生 福井大学, 医学部附属病院, 助教 (30377460) ; 中村 肇 公益財団法人田附興風会, その他部局等, その他 (70303914) [辞退]
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 酸化ストレス / チオレドキシン / 急性腎障害

研究実績の概要

臨床検体での測定を想定して分解変性について尿サンプル、血液サンプル、リコンビナントチオレドキシン（TRX）を48時間37℃で加温したり、凍結融解を40回繰り返してTRXが検出感度以上に存在するかどうかを調べた。尿中TRXはWestern blotでスメアを引くことなく、シングルバンドとして検出され、長時間加温や凍結融解の処理をしなかった比較試料とほぼ同じ濃度で検出された。臨床検体においてTRXが酸化ストレスに関連している傍証として急性腎障害の患者の尿中TRXが正常人の尿中TRXに比べて酸化型TRXが増加していることをRedox Western Blot法にて観察した。
新規の迅速レドックス診断法として、アルカリフォスファターゼ（ALP）標識抗TRX抗体とビオチン標識抗TRX抗体を用いたサンドイッチアッセイによって固相フィルター上にTRX抗原をトラップする新たな測定システムを開発した。ALPの基質である発光基質を固相フィルターに添加することによって得られる発光シグナルを光電子倍増管（PMT）を用いて検出し、予め得られた検量線と比較することによって、TRX量を算出することが出来た。これまで８時間かかっていた測定が迅速アッセイ法により15分程度で測定が出来た。
尿中TRXを正常健康人、急性腎障害、顕微鏡的多発血管炎、メサンギウム増殖性腎炎、巣状糸球体硬化症、間質性腎炎、ループス腎炎、IgA腎症、膜性腎症、糖尿病性腎症の患者で測定したところ尿中TRXは急性腎障害で有意に上昇していた。尿中TRXを用いて急性腎障害と急性腎障害以外の腎疾患を鑑別する診断能力は、カットオフ値43.0 μg/gにてROC曲線下面積は0.94 (95%信頼区間0.90-0.98)、感度0.88、特異度0.88とNgal、KIM-1、L-FABPなどとほぼ同等に優れていることが分かった。

研究成果

• [雑誌論文] Gender- and disease-specific urinary thioredoxin in chronic kidney disease patients with or without type 2 diabetic nephropathy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tobino K, Muso E, Iwasaki Y, Yonemoto S, Kasuno K, Tsukamoto T, Nakamura H, Tomino Y.
  • 雑誌名: Nephrology (Carlton). 巻: 20 ページ: 368-374
  • DOI: 10.1111/nep.12403.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A heterozygous female with Fabry disease due to a novel α-galactosidase A mutation exhibits a unique synaptopodin distribution in vacuolated podocytes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi N, Yokoi S, Kasuno K, Kogami A, Tsukimura T, Togawa T, Saito S, Ohno K, Hara M, Kurosawa H, Hirayama Y, Kurose T, Yokoyama Y, Mikami D, Kimura H, Naiki H, Sakuraba H, Iwano M.
  • 雑誌名: Clin Nephrol. 巻: 83 ページ: 301-308
  • DOI: 10.5414/CN108317.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Renal redox dysregulation in AKI: application for oxidative stress marker of AKI. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kasuno K, Shirakawa K, Yoshida H, Mori K, Kimura H, Takahashi N, Nobukawa Y, Shigemi K, Tanabe S, Yamada N, Koshiji T, Nogaki F, Kusano H, Ono T, Uno K, Nakamura H, Yodoi J, Muso E, Iwano M.
  • 雑誌名: Am J Physiol Renal Physiol. 巻: 307 ページ: F1342-1351
  • DOI: 10.1152/ajprenal.00381.2013.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Telmisartan activates endogenous peroxisome proliferator-activated receptor-δ and may have anti-fibrotic effects in human mesangial cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mikami D, Kimura H, Kamiyama K, Torii K, Kasuno K, Takahashi N, Yoshida H, Iwano M.
  • 雑誌名: Hypertens Res. 巻: 37 ページ: 422-431
  • DOI: 10.1038/hr.2013.157.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Telmisartan, a possible PPAR-δ agonist, reduces TNF-α-stimulated VEGF-C production by inhibiting the p38MAPK/HSP27 pathway in human proximal renal tubular cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kimura H, Mikami D, Kamiyama K, Sugimoto H, Kasuno K, Takahashi N, Yoshida H, Iwano M.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 454 ページ: 320-327
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.10.077.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 新規尿中バイオマーカー (2015)
  • 著者名/発表者名: 糟野健司
  • 学会等名: 第58回（平成27年）日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 2015-06-05 – 2015-06-07
  • 招待講演
• [図書] レドックスUPDATE (医学のあゆみ別冊) (2015)
  • 著者名/発表者名: 糟野健司
  • 総ページ数: 189
  • 出版者: 医歯薬出版