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2013 年度 実施状況報告書

NADPHオキシターゼとスタニオカルシンを用いた乳癌の新規転移マーカーの開発

研究課題

研究課題/領域番号 24590700
研究機関札幌医科大学

研究代表者

田中 真樹  札幌医科大学, 医学部, 助教 (40207139)

研究分担者 渡邉 直樹  札幌医科大学, 医学部, 教授 (10158644)
小林 大介  札幌医科大学, 医学部, 講師 (50295359)
栗林 景晶  札幌医科大学, 医学部, 講師 (50381257)
キーワードstanniocalcin / NADPH oxidase / 転移能 / 浸潤能
研究概要

腫瘍細胞の転移能に影響を及ぼす因子の一つに、NADPH Oxidase(Nox)により産生される活性酸素がある。Noxの中でも細胞内カルシウムで活性化されるのは、Nox5とDuox のみである。一方、細胞内カルシウムを調節するStanniocalcin-1(STC-1)が、各種腫瘍細胞で高発現することが明らかとなっている。そこで、本研究ではSTC-1がNox5とDuox を活性化させ、活性酸素の産生を高め、乳癌細胞の転移能を増強させる可能性について検討している。既に7種の乳癌細胞を対象として、細胞間で発現量の差異はみとめられるものの、全例でSTC-1、2 例で Nox5 の発現を確認した。そこで、ヒト乳癌細胞株のMDA-MB-231を用い、全長(分泌型)STC-1発現細胞(MB231-S)を作製し、STC-1が転移能に及ぼす影響を検討した。 MB231-S細胞の浸潤能は、対照細胞(MB231-M)と比べ有意に亢進した。浸潤能は、細胞増殖能、運動能、接着能や基質分解能の総和であるが、MB231-S細胞では運動能のみが高まっていた。さらに、両細胞をマウス尾静脈から投与すると、MB231-S細胞の肺転移結節数はMB231-M細胞と比較し増強した。
STC-1による運動能亢進が、細胞内、細胞外あるいは両者のうち、どのシグナル伝達で起こっているのか解析するため、非分泌型STC-1発現細胞(MB231-NS)を作製し検討した。その結果、MB231-S細胞でのみ運動能の亢進がみられた。さらに、各細胞の培養上清を親細胞であるMDA-MB-231に添加すると、MB231-S細胞のそれのみが運動能を高めた。すなわち、STC-1は細胞外からのシグナル伝達を介し、運動能を亢進させることが証明された。上記の成果をClin Exp Metastasisに投稿中である。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

STC-1に関しては、乳癌細胞における発現解析、運動能、浸潤能およびその機序を検討など、前述したとおり順調に進んでいる。乳癌患者の原発巣および所属リンパ節を用いたSTC-1の免疫染色に関しては、数種類の抗体から特異的なものを選択し、濃度および反応時間等の条件も決定し、現在、解析中である。
Nox5およびDuoxについては、mRNAの発現解析は行ってるが、siRNAのノックダウン効果の検討は結果が得られていない。また、Nox5発現ベクターは作製され遺伝子導入を行い細胞運動の解析を直ちに行う予定である。

今後の研究の推進方策

研究計画書に記載した方針に従い、特に大きな変更は無く、研究を遂行する。

次年度の研究費の使用計画

一部の研究が、平成25年度と平成26年度の両年度で行う予定であるため。
次年度使用額728,017円は、上記の研究を推進するため、試薬・薬品、実験用硝子製品および実験用プラスチック製品の購入に用いる予定である。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2014 2013

すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] CD7 promote extramedullary involvement of the B-cell acute lymphoblastic leukemia line Tanoue by enhancing integrin β2-dependent cell adhesiveness2014

    • 著者名/発表者名
      Kondoh T, Kuribayashi K, Tanaka M, Kobayashi D, Yanagihara N, Watanabe N.
    • 雑誌名

      In J Oncol

      巻: in press ページ: -

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Prophylactic and therapetic affects Acanthopanax senticosus HARMS extract on murine collagen-induced arthritis.2014

    • 著者名/発表者名
      Takahashi Y, Tanaka M, Murai R, Kuribayashi k, Kobayashi D, Watanabe N.
    • 雑誌名

      Phytothera Res

      巻: in press ページ: -

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Protein Kinaze c zeta regulates survivin expression and resists apoptosis in colon cancer.2014

    • 著者名/発表者名
      Umemori Y, Kuribayashi K, Nirasawa S, Kondo K, Tanaka M, Yanagihara N, Watanabe N.
    • 雑誌名

      In J Oncol

      巻: in press ページ: -

  • [雑誌論文] Identification of autoantibodies expressed in acquired aplastic anaemia.2013

    • 著者名/発表者名
      Goto M, Kuribayashi K, Takahashi Y, Kondoh T, Tanaka M, Kobayashi D, Watanabe N.
    • 雑誌名

      Br J Haematol

      巻: 160 ページ: 359-362

    • DOI

      10.1111/bjh.12116

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Reconstructing a 3-dimensional image of the results of antinuclear antibody testing by indirect immunofluorescence.2013

    • 著者名/発表者名
      Murai R, Yamafa K, Tanaka M, Kuribayashi K, Kobayashi D, Watanabe N.
    • 雑誌名

      J Immunol Methods

      巻: 387 ページ: 312-316

    • DOI

      10.1016/j.jim.2012.10.004

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Intracellular superoxide dismutase activity defines invasiveness of murine T- lymphoma cell line L5187-ML-25 in vitro and in vivo.2013

    • 著者名/発表者名
      Tanaka M, Kuribayashi K, Kogawa K, Nakamura K, Watanabe N.
    • 雑誌名

      Leukemia Res

      巻: 37 ページ: 89-92

    • DOI

      10.1016/j.leukres.2012.07.021.

  • [雑誌論文] Alteration of masticatory function by diet change induces stress responses in wistar rats.2013

    • 著者名/発表者名
      Suzuki H, Tanaka M. Kawanishi K, Koshino H, Hirai T, Fujii H, Takeda H, Kuribayashi K, Watanabe N.
    • 雑誌名

      In Vivo

      巻: 27 ページ: 611-616

    • 査読あり
  • [学会発表] 癌細胞の転移能獲得におけるCa調節蛋白Stanniocalcin-1の意義2013

    • 著者名/発表者名
      村井良精、田中真樹、栗林景晶、小林大介、渡邉直樹
    • 学会等名
      第47回日本臨床検査医学会北海道支部総会
    • 発表場所
      札幌市北海道大学
    • 年月日
      20130921-20130921
  • [学会発表] 癌細胞の転移能獲得におけるCa調節蛋白Stanniocalcin-1の意義2013

    • 著者名/発表者名
      村井良精、田中真樹、栗林景晶、小林大介、渡邉直樹
    • 学会等名
      第53回日本臨床化学会年次学術集会
    • 発表場所
      徳島市あわぎんホール
    • 年月日
      20130830-20130901

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公開日: 2015-05-28  

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