| 研究課題/領域番号 |
24590700
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
田中 真樹 札幌医科大学, 医学部, 助教 (40207139)
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| 研究分担者 |
渡邉 直樹 札幌医科大学, その他部局等, 名誉教授 (10158644)
小林 大介 札幌医科大学, 医学部, 講師 (50295359)
栗林 景晶 札幌医科大学, 医学部, 講師 (50381257)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | stanniocalcin / NADPH oxidase / 転移能 / 浸潤能 |
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| 研究実績の概要 |
腫瘍細胞の転移能に影響を及ぼす因子の一つに、NADPH Oxidase(Nox)により産生される活性酸素がある。ヒトのNoxファミリーは、７つのメンバーが含まれ、種々な細胞において発現が認められる。その中でもカルシウム結合モチーフを有し、カルシウムにより活性化するものに、Nox 5、Duox 1と2がある。一方、細胞内カルシウム濃度を調整するStanniocalcin-1 (STC-1)が、各種腫瘍細胞で高発現することが明らかとなっている。そこで、本研究の目的はSTC-1によりNox 5やDuoxが活性化され、活性酸素の産生が亢進するにより、乳癌細胞の転移能を増強させる可能性について検討している。まず、７種のヒト乳癌細胞におけるSTC-1の発現は、全例で確認された。そこで、MDA-MB-231細胞を用い全長(分泌型)STC-1発現細胞(MB231-S)を作製し、STC-1が転移能に与える影響を検討した。MB231-Sの浸潤能および運動能は、MB231-Mに比べ運動能のみに亢進が認めれられた。マウスの尾静脈から細胞を移植して肺転移結節数を比較すると、MB231-Sは有意に増強した。
STC-1による運動能亢進が細胞内、細胞外あるいは両者のうち、どのシグナル伝達で起こっているかを解析するため、非分泌型STC-1発現細胞(MB231-NS)を作製して検討した。各細胞の培養上清を親細胞であるMDA-MB-231に添加すると、MB231-Sの培養上清のみで運動能が高まった。上記に成果をClin Exp Metasatsis(31:787-794,2014)に報告した。
ヒト乳癌細胞のNoxファミリーの発現はNox 5で5種類、Duox 1で2種類の細胞に認められた。他のNoxファミリーの発現は、みられなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
STC-1においては、乳癌細胞の転移に関与するメカニズムを証明した。免疫組織染色による発現検討は、STC-1の特異的な抗体を選ぶ事に時間を費やし、現在、検討中である。Nox ファミリーの検討は、各種ヒト乳癌細胞の発現解析は終了した。問題点として、市販されているNox5 の特異的な抗体の選定が終了していなく、タンパクレベルでの解析が進んでいない。また、直ちにNox5とDuoxに関しのsiRNAのノックダウンによる運動能の測定を行う予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
STC-1に関しては、Clin Exp Metasatsis(31:787-794,2014)に報告し概ね終了している。残りの検討課題は、組織の免疫染色で使用する特異的な抗体の選定も終了し、現在検討中である。
Nox 5およびDuoxの発現検討は終了したので、siRNAのノックダウンによる運動能の解析を直ちに行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
Nox 5とDuoxに関してsiRNAのノックダウンに関して良好な結果が得られていない。その理由は、市販の特異的な抗体が選定できていないためである。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度使用額216,312円は上記の研究を行うため、Nox 5、Duox 抗体やsiRNA等の消耗品を購入する。
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