| 研究課題/領域番号 |
24590949
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
城 卓志 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30231369)
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| 研究分担者 |
谷田 諭史 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30528782)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 炎症性腸疾患 / TNF-α / ADAM17 / ARP36-2 / 新規治療ターゲット |
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| 研究実績の概要 |
TNFαは炎症性腸疾患の進展・増悪に重要な役割を果たしている炎症性サイトカインであり、その制御が炎症性腸疾患治療の中心となっている。細胞膜上の膜結合型TNFαは、ADAM17により可溶型TNFαに切断・遊離（shedding）されるADAM17は２型膜タンパク（細胞質内にN末端が存在する）TNF-αのほかにも、１型膜タンパク（細胞質内にC末端が存在する）のAmphiregulin、Heparin-binding epidermal growth factor (HB-EGF)、Transforming growth factor(TGF-α)など多様である。われわれは、ADAM17がもつ標的膜蛋白切断の多様性を解明するために、ADAM17に関連する介在タンパクが存在するのではないかと仮説をたて、ADAM17と相互作用するタンパクを網羅的に同定することで、TNFαsheddingのメカニズムを明らかにし、新規治療ターゲットを探索した。【方法】大腸上皮細胞株（HCT116）および単球細胞株（U937）を使用した。ADAM17によるTNFαsheddingに関連する介在タンパクを同定するため、抗Amphiregulin抗体で共免疫沈降後MALDI/TOFMSにて網羅的に同定した。AP-TNFα発現させ、TNFαshedding測定系を確立した。MALDI/TOFMSにて同定された候補蛋白をsiRNAで欠失させたあと、TNFαsheddingを測定した。【結果】MALDI/TOFMS解析にて、amphiregulin-regulating protein (ARP) 36-2に着目した。HCT116細胞およびU937細胞を刺激すると、培養液中のTNFα濃度が経時的に増加した。KB-R7785、siRNAによりADAM17を欠失すると、有意に抑制された。siRNAによりARP36-2を欠失しても、TNFαsheddingによる濃度上昇が、有意に抑制された。ARP36-2は，1型膜タンパクのAmphiregulinやHB-EGFのsheddingを抑制しなかった。【結語】ARP36-2は、TNFαsheddingを制御する炎症性腸疾患新規治療ターゲットになりうると思われた。
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