アディポサイトカイン分泌異常に基づくＮＡＳＨ病態解析からの新規糖鎖マーカーの開発

2012 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24590972
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 鎌田 佳宏 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30622609)
• 研究分担者: 三善 英知 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20322183)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: (1) 非アルコール性脂肪性肝炎（NASH） / 糖鎖 / フコシル化ハプトグロビン / Mac2 binding protein / アディポサイトカイン

研究概要

平成24年度は計画書に従い、まずヒト非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）患者血清126検体を用いて血清の新規糖鎖マーカーのシーズ探索を行った。24例の健常コントロール、19例の単純脂肪肝患者、107例の非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）患者血清を用いた。以下の新治験を得た。1，血中フコシル化ハプトグロビン値を当研究室で開発したELISAキットを用いて測定したところ健常コントロールと単純脂肪肝患者では差を認めなかったがNASH患者では著明に上昇していた。2，血中フコシル化ハプトグロビン値は従来の単一血清NASH診断マーカーとして知られているcytokeratin 18 fragment（M30）より有用性が高かった。3，血中フコシル化ハプトグロビン値はNASHの特徴的な組織像である風船様肝細胞の出現頻度と強い相関関係を持っており、多変量解析の結果でも他の血中マーカーと独立して風船様肝細胞のスコアの決定因子であった。4，フコシル化の標的蛋白として我々が既に同定していたMac2 binding protein (Mac2bp)に着目し、同様に我々の開発したELISAキットを用いてNASH鑑別能について検討したところフコシル化ハプトグロビン以上に有用性の高いNASH鑑別マーカーであることがわかった。5，血中Mac2bp濃度は健常コントロールに比べ、単純脂肪肝患者で有意に高く、NASH患者ではさらに高値を示した。また線維化のステージ進展に伴い有意に上昇していった。
以上の成果について現在論文投稿中である。25年度以降はさらにMac2bpのフコシル化の程度の違いがNASHの診断マーカーになるかどうかについて検討していく。またフコシル化タンパク、Mac2bpに着目して動物モデルを用いた検討を行い、フコシル化、Mac2bpのNASH進展における意義について基礎的検討を展開していきたい。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

集めたNAFLD患者血清を用いて当初予想した理論通り血中のフコシル化タンパクがNASHと単純性脂肪肝の鑑別マーカーになりうることを示すことができた。まだ症例数が少ない点、validation studyが出来ていない点については今後多施設共同研究によりさらに症例を蓄積して行っていきたい。
マウス実験については現在新規アディポサイトカインsecreted frizzled related protein 5 (Sfrp5)欠損マウスを用いた実験、肝臓のフコシル化に重要なFut8の欠損マウスを用いた実験を準備中である。

今後の研究の推進方策

ヒト検体を用いた検討については今後多施設共同研究により症例数を増やし、今回見いだした血液糖鎖マーカーがNASH鑑別マーカーとなりうるかについてvalidation studyを行っていきたい。
マウス実験については作製したSfrp5 KOマウス、Fut8 KOマウスを用いての検討を行っていきたい。

次年度の研究費の使用計画

ヒト検体を用いた研究については市販のELISAキットを用いて測定数を増やしていくためキット購入に費用がかかる。またマウス実験についてはマウス維持費、NASHモデルマウス実験のためのNASH誘発食餌の購入、実験の解析のためPCR関連試薬、抗体の購入、レクチンアレイなどの糖鎖解析のため研究費を使用していく。

研究成果

• [雑誌論文] Conditional knockout of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the liver accelerates carbon tetrachloride-induced liver injury in mice. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takemura T, Yoshida Y, Kiso S, Saji Y, Ezaki H, Hamano M, Kizu T, Egawa M, Chatani N, Furuta K, Kamada Y, Iwamoto R, Mekada E, Higashiyama S, Hayashi N, Takehara T.
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 43 ページ: 384-93
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2012.01074.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pitavastatin ameliorated the progression of steatohepatitis in ovariectomized mice fed high fat and high cholesterol diet. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Kiso S, Yoshida Y, Chatani N, Kizu T, Hamano M, Egawa M, Takemura T, Ezaki H, Furuta K, Hayashi N, Takehara T.
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 43 ページ: 401-12
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2012.01082.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lectin-based Immunoassay for Aberrant IgG Glycosylation as the Biomarker for Crohn's Disease. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shinzaki S, Kuroki E, Iijima H, Tatsunaka N, Ishii M, Fujii H, Kamada Y, Kobayashi T, Shibukawa N, Inoue T, Tsujii M, Takeishi S, Mizushima T, Ogata A, Naka T, Plevy SE, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Inflamm Bowel Dis 巻: 19 ページ: 321-31
  • DOI: 10.1097/MIB.0b013e318280eade.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reevaluation of a lectin antibody ELISA kit for measuring fucosylated haptoglobin in various conditions. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Kinoshita N, Tsuchiya Y, Kobayashi K, Fujii H, Terao N, Kamihagi K, Koyama N, Yamada S, Daigo Y, Nakamura Y, Taniguchi N, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 417 ページ: 48-53
  • DOI: 10.1016/j.cca.2012.12.014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] N-Acetylglucosaminyltransferase V regulates TGF-β response in hepatic stellate cells and the progression of steatohepatitis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Mori K, Matsumoto H, Kiso S, Yoshida Y, Shinzaki S, Hiramatsu N, Ishii M, Moriwaki K, Kawada N, Takehara T, Miyoshi E
  • 雑誌名: Glycobiology 巻: 22 ページ: 778-87
  • DOI: 10.1093/glycob/cws012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Protective role of adiponectin against ethanol-induced gastric injury in mice. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto S, Watabe K, Araki H, Kamada Y, Kato M, Kizu T, Kiso S, Tsutsui S, Tsujii M, Kihara S, Funahashi T, Shimomura I, Hayashi N, Takehara T
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 巻: 302 ページ: G773-80
  • DOI: 10.1152/ajpgi.00324.2011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of polarized secretion of fucosylated alpha-fetoprotein in HepG2 cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa T, Moriwaki K, Terao N, Nakagawa T, Miyamoto Y, Kamada Y, Miyoshi E
  • 雑誌名: J Proteome Res 巻: 11 ページ: 2798-806
  • DOI: 10.1021/pr201154k
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adiponectin negatively correlates with alcoholic and non-alcoholic liver dysfunction: Health check-up study of Japanese men. (2012)
  • 著者名/発表者名: Hamano M, Kamada Y, Kiso S, Furuta K, Kizu T, Chatani N, Egawa M, Takemura T, Ezaki H, Yoshida Y, Watabe K et al.
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 43 ページ: 238-48
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2012.01066.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Physiological roles of N-acetylglucosaminyltransferase V (GnT-V) in mice. (2012)
  • 著者名/発表者名: Miyoshi E, Terao M, Kamada Y
  • 雑誌名: BMB Rep 巻: 45 ページ: 554-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] エストロゲンのNASH病態進展への関与について (2012)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏
  • 雑誌名: 医学と薬学 巻: 68 ページ: 435
  • 査読あり
• [学会発表] 閉経女性NASH患者治療における高コレステロール血症の意義:マウスモデル、健診データでの検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、木曽真一、竹原徹郎
  • 学会等名: 第99回日本消化器病学会総会
  • 発表場所: 鹿児島城山観光ホテル
  • 年月日: 20130321-20130323
• [学会発表] エストロゲンのNASH病態進展への関与について (2012)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、木曽真一、吉田雄一、三善英知、竹原徹郎
  • 学会等名: 第8回消化器病における性差医学・医療研究会
  • 発表場所: 京都大学医学部芝蘭会館
  • 年月日: 20120804-20120804
• [学会発表] 肝臓癌におけるフコシル化ハプトグロビンのバイオマーカーとしての有用性に関する検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、浅澤 瞳、佐々木夢香、三田英治3、加藤道夫、金 鏞国、根津理一郎、竹原徹郎、三善英知
  • 学会等名: 第48回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: ホテル日航金沢
  • 年月日: 20120606-20120607
• [図書] 消化器疾患治療マニュアル (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉田雄一、鎌田佳宏
  • 総ページ数: 466
  • 出版者: 金芳堂
• [図書] 消化器疾患治療マニュアル (2013)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、吉田雄一
  • 総ページ数: 466
  • 出版者: 金芳堂