| 今後の研究の推進方策 |
モノクロタリン誘発肺高血圧モデルマウスや低酸素誘発肺高血圧モデルマウスを作成し、その際の、Notch1, Dll4, HERP1, PIAS1, TGFbeta, TGFbetaRII, BMP2, BMP2Rの発現変化を免疫染色、in situハイブリダイゼーション、real-time RT-PCR法にて検討する。また、これらの因子が、平滑筋のどの分化段階で発現しているか明らかにするために、他の平滑筋分化調節因子(myocardin, Kruppel-like factors, GATA6等)の局在も同時に検討し、転写因子の発現から見た肺高血圧血管病変の特徴を明らかにする。
培養肺動脈平滑筋細胞において、TGFbetaによる平滑筋分化マーカーの誘導にPIAS1が関与していることを示せたため、種々の転写因子が結合すると考えられる部位に変異を持つSM alpha-actinやSM-MHC、SM22alphaのプロモーター/レポーターコンストラクトを用い、培養肺動脈平滑筋細胞にて、ルシフェラーゼアッセイ法にてNotchシグナルやTGFbetaシグナルの反応部位を検討する。ついで、その結合サイトに結合する転写因子をChIP assayにて検討する。また、Sumoylation assay法にてその結合因子がSUMO化されるかどうかを検討する。さらに、degradation assay等により、蛋白の転写後修飾について、検討する。肺高血圧症の発症の仮説として、近年、肺動脈末梢血管にある前駆細胞群の増殖や分化転換が提唱されている。そのため、上記の検討を肺血管内膜内皮細胞でも行い、NotchシグナルあるいはTGFbetaシグナルが、平滑筋様細胞、あるいは血管内皮および平滑筋細胞マーカーを同時発現するtransitional cellsへの分化転換を誘導するか否かを検討する。
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