| 研究課題/領域番号 |
24591113
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
岡本 隆二 三重大学, 医学部附属病院, 助教 (60378346)
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| 研究分担者 |
伊藤 正明 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00223181)
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| キーワード | 心臓線維化 / 心肥大 / 内皮間葉移行現象 / TGFβ / Rhoキナーゼ |
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| 研究概要 |
心臓線維化における、内皮間葉移行の分子メカニズムを解明するために、内皮細胞でPECAM1(内皮細胞マーカー), αSMA（平滑筋アクチン）およびFSP1（線維芽細胞特異的タンパク質）の免疫染色を、マウスの疾患モデルおよび剖検心で行ったところ、FSP1のシグナルが弱く、またin vivoおよびin vitroにおいてもFSP1とPECAM1が重なる細胞は観察されなかった。剖検心では、PECAM1とαSMAの共発現をごく少数に認めるのみであった。PECAM1とFSP1の一致は認められなかった。このため使用するレポーターマウスを変更した。内皮間葉移行現象を解析するには、内皮細胞由来の細胞を経時的に追いかける必要があり、pTie2-CreマウスとROSA26-pCAG-lox-stop-lox tdTomatoマウスを交配させることで、内皮細胞由来の細胞をマーキングすることとした。このマウスをさらにpFSP1-EGFPマウスと交配させ、心筋梗塞モデルを作成し、tdTomatoおよびEGFPのシグナルが重なる部位を、共焦点顕微鏡を用いて検討を行なっている。さらに横行大動脈結紮モデルも並行して行い、線維芽細胞の伸展様式を解析する予定である。
一方、代表的な臓器線維化モデルである、尿管結紮モデルを1)Rhoキナーゼ1(ROCK1) KOマウス、2)Rhoキナーゼ2(ROCK2) KOマウス、3)野生型＋ファスジル投与、4)野生型、の４群で行ったところ、2)=3)>1)>3)の順で線維化が少なかった。心筋梗塞モデルにおける心臓線維化も同様な傾向があり、現在、マクロファージの浸潤、CTGFの発現、酸化ストレス等の観点と、炎症・壊死・線維化の時相の２つの観点から4群間で相違があるのかを検討している。我々は、ROCK2とROCK1の違いを説明する分子としてFHL2を同定しており（論文1）、FHL2の関与の有無についても検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
海外および国内からのマウスのクリーニングに時間を要した。pTie2-Creマウス、ROSA26-pCAG-lox-stop-lox tdTomatoマウスおよびROCK1&2KOマウスの交配にも時間を要する。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き心筋梗塞モデルおよび横行大動脈結紮モデルを作成し、tdTomato(Tie2-Creで内皮細胞由来細胞を標識)とaSMAやEGFP(FSP1を標識)とどの時点、及びどの場所で一致するのか、経時的に病理標本を作製し、解析を行う。また、tdTomato陰性でEGFP陽性の細胞を間質および骨髄由来の線維芽細胞と判断し、その比を疾患モデルごとに検討する。
一方でROCK1およびROCK2欠損マウスと上記のマウスを交配中である。上記と同様に疾患モデルを作成し、野生型マウスと比べて、内皮間葉移行の頻度に違いがあるか検討を行う。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
試薬等、当初予定していた金額より安価で購入できたため、残額が生じました。
次年度の消耗品購入の一部にあてる予定です。
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