筋ジストロフィーの遺伝子・幹細胞移植治療の開発

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24591284
• 研究機関: 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター
• 研究代表者: 木村 円 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター, トランスレーショナル・メディカルセンター臨床研究支援部, 早期・探索的臨床試験室長 (60433025)
• キーワード: 遺伝子治療 / 幹細胞移植治療 / 筋ジストロフィー / レンチウイルスベクター

研究概要

複数の短縮バージョンのdystrophin遺伝子および、骨格筋への特異的分化誘導を促す因子として転写因子活性をコントロールできるmyoD, Pax7, Pax3、マーカー遺伝子としてEGFP, LacZを発現するLentiviral vectorコンストラクトを作製した。発現調節に骨格筋特異的promoter（CK6, MHCK7, CK8など）やmiR targetシークエンス等（樹状細胞等の免疫担当細胞での発現を避け宿主の免疫応答を抑える）を組み合わせた。短縮型dystrophinについて、モデル動物mdx mouse にベクターを直接投与もしくはex vivoで遺伝子導入を行った。骨格筋線維と骨格筋幹細胞（筋衛星細胞 satellite cellなど）で長期間の遺伝子発現を観察した。長期発現の可否、病理学および病態生理学的な有効性の評価を検討・準備中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

複数の短縮バージョンのdystrophin遺伝子および、骨格筋への特異的分化誘導を促す因子として転写因子活性をコントロールできるmyoD, Pax7, Pax3を含む発言コンストラクトを作成。さらに細胞の運命付けを司るregulatable geneとしてmyoD cDNAにestrogen receptor hormone binding domainを組み込んだmyoD-ER(T) 融合遺伝子を準備しており、異なるcell fateの細胞をソースとし骨格筋への誘導をコントロールし治療に応用する方法の治療応用については、基本コンセプトは確立している。現在も臨床で安全に使われている薬剤TamoxifenによってmyoDのON-OFFがコントロールされる系を実現し、in vivoでもコントロール可能である。さらに細かいfate controlの系については検討中である。

今後の研究の推進方策

治療薬の候補となる遺伝子を含むコンストラクトの作成・検証を進めると同時に、幹細胞の培養系、およびin vivoへの応用とコンセプトの実証をすすめる。特に治療効果に直結する免疫応答の調節について、個体の中での遺伝子発現コントロールとさらに深い検討を行いたい。
遺伝子操作、細胞培養、動物実験のための、物品購入、動物の購入等に充当する。研究補助員（パート）1名を雇用する。研究発表等に関わる費用に充当する。

次年度の研究費の使用計画

研究に関する学会等に参加する予定でしたが、スケジュール等が合わず行けなかった。
研究補助員（非常勤）を雇用予定でいたが、研究に見合う人材が見つからなかった。
研究補助員（非常勤）を雇用し、人件費に充てたい。
試薬等の物品購入、動物の購入に充当する。
研究に関する学会の旅費に充てたい。

研究成果

• [雑誌論文] Prednisolone improves walking in Japanese Duchenne muscular dystrophy patients. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi F, Yonemoto N, Nakamura H, Shimizu R, Komaki H, Mori-Yoshimura M, Hayashi YK, Nishino I, Kawai M, Kimura E†, Takeda S.
  • 雑誌名: J Neurol. 巻: 260 ページ: 3023-3029
  • DOI: 10.1007/s00415-013-7104-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] The TREAT-NMD Duchenne muscular dystrophy registries: conception, design, and utilization by industry and academia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Bladen CL, Rafferty K, ..., Kimura E, ..., Lochmuller H.
  • 雑誌名: Hum mutat. 巻: 34(11) ページ: 1449-1457
  • DOI: 10.1002/humu.22390
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics of Japanese Duchenne and Becker muscular dystrophy patients in a novel Japanese national registry of muscular dystrophy (Remudy). (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura H, Kimura E†, Mori-Yoshimura M, Komaki H, Matsuda Y, Goto K, Hayashi YK, Nishino I, Takeda SI, Kawai M.
  • 雑誌名: Orphanet J Rare Dis. 巻: 8(1) ページ: 60
  • DOI: 1750-1172-8-60 [pii] 10.1186/1750-1172-8-60
  • 査読あり
• [雑誌論文] Optineurin is potentially associated with TDP-43 and involved in the pathogenesis of inclusion body myositis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamashita S, Kimura E, Tawara N, Sakaguchi H, Nakama T, Maeda Y, Hirano T, Uchino M, Ando Y.
  • 雑誌名: Neuropathol Appl Neurobiol. 巻: 39(4) ページ: 406-416
  • DOI: 10.1111/j.1365-2990.2012.01297.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Muscle biopsy findings predictive of malignancy in rare infiltrative dermatomyositis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Uchino M, Yamashita S, Uchino K, Mori A, Hara A, Suga T, Hirahara T, Koide T, Kimura E, Yamashita T, Ueda A, Kurisaki R, Suzuki J, Honda S, Maeda Y, Hirano T, Ando Y.
  • 雑誌名: Clin Neurol Neurosurg. 巻: 115(5) ページ: 603-606
  • DOI: S0303-8467(12)00410-6 [pii] 10.1016/j.clineuro.2012.07.019
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient and Reproducible Myogenic Differentiation from Human iPS Cells: Prospects for Modeling Miyoshi Myopathy In Vitro. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanaka A, Woltjen K, Miyake K, Hotta A, Ikeya M, Yamamoto T, Nishino T, Shoji E, Sehara-Fujisawa A, Manabe Y, Fujii N, Hanaoka K, Era T, Yamashita S, Isobe K, Kimura E, Sakurai H.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 8(4): ページ: e61540
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0061540 PONE-D-12-35707 [pii]
  • 査読あり
• [学会発表] 希少疾患レジストリー：国際協調と臨床開発における役割 ー Remudyの現状と目指すもの (2013)
  • 著者名/発表者名: 木村 円
  • 学会等名: 第34回日本臨床薬理学会学術総会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京）
  • 年月日: 20131204-20131206
  • 招待講演
• [学会発表] Neuromuscular disease Registry (2013)
  • 著者名/発表者名: Kimura E.
  • 学会等名: 第一回上海DMDトランスレーショナル医学と健康介護シンポジューム
  • 発表場所: Children's Hosital of Fudan University 上海, 中国
  • 年月日: 20131020-20131021
  • 招待講演
• [学会発表] Current status of dystrophinopathy patient registry in Japan: Remudy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kimura E, Nakamura H, Hayashi YK, Mori-Yoshimura M, Takeuchi F, Shimizu R, Komaki H, Nishino I, Kawai M, Takeda S
  • 学会等名: The 18th International Congress of the World Muscle Society
  • 発表場所: Asilomar Conference Grounds,California,USA
  • 年月日: 20131001-20131005
• [学会発表] Current status of patient registration in Japan: REMUDY - Infrastructure for new drug development to treat muscular dystrophy (2013)
  • 著者名/発表者名: Kimura E, Nakamura H, Hayashi YK, Mori-Yoshimura M, Takeuchi F, Shimizu R, Komaki H, Nishino I, Kawai M, Takeda S
  • 学会等名: The 12th Annual Scientific Meeting of the Asian and Oceanian Myology Center (AOMC)
  • 発表場所: Sofitel Xi'an on Renmin Square Xi’an, China
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] Remudy・DMD/BMD患者情報登録の現状 (2013)
  • 著者名/発表者名: 木村 円, 林由起子, 森まどか, 清水玲子, 小牧宏文, 西野一三, 川井 充, 武田伸一
  • 学会等名: 第54回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京）
  • 年月日: 20130529-20130601
• [学会発表] The CARE-NMD survey in Japan, (2013)
  • 著者名/発表者名: Kimura E.
  • 学会等名: The CARE-NMD International Conference on DMD
  • 発表場所: Hilton Westend,Budapest, Hangary
  • 年月日: 20130418-20130419
  • 招待講演
• [図書] 今日の神経疾患治療指針 第2版 (2013)
  • 著者名/発表者名: 木村円, 武田伸一
  • 総ページ数: 1100
  • 出版者: 医学書院
• [図書] 中外医学社 (2013)
  • 著者名/発表者名: 木村円
  • 総ページ数: 206
  • 出版者: 中外医学社
• [備考] Remudy
  • URL: http://www.remudy.jp
• [備考] 国立精神・神経医療研究センター トランスレーショナル・メディカルセンター
  • URL: http://www.ncnp.go.jp/tmc/