| 研究課題/領域番号 |
24591320
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 研究機関 | 山梨大学 |
|---|
研究代表者 |
遠藤 登代志 山梨大学, 医学工学総合研究部, 准教授 (00152017)
|
|---|
| 研究分担者 |
金重 勝博 山梨大学, 医学部附属病院, 助教 (20377518)
小林 哲郎 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (30113442)
田中 昌一郎 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (70377521)
滝澤 壮一 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (80456467)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| キーワード | 劇症１型糖尿病 / Amylaseα-2A / 自己抗体 / 慢性膵炎 / DNA 免疫 |
|---|
| 研究概要 |
劇症１型糖尿病は急激に発症する極めて重篤な糖尿病であり、その迅速な診断法としてAmylaseα-2A (AMY)に対する自己抗体(AMY-Ab)をELISA法にて検出することが有用であることを明らかにして来た。しかし、この測定法はbackgroundが比較的高く更に改良が必要であるため、Amylaseα-2Aを21～25アミノ酸からなるペプチドを合成し、これらを抗原としてELISAを行った。その結果、Amylaseα-2AのC末端に近いペプチド７を用いた際に、従来の結果がほぼ再現され、かつbackgroundが低下することが判明した。
この改良ELISAにて種々の膵関連疾患の血中AMY-Abの有無を検討した結果、アルコール性慢性膵炎患者中に高率に検出され、また非アルコール性慢性膵炎患者中にも存在することが明らかとなった。後者は原因不明の慢性膵炎であり、新たな疾患の存在が示唆された。
一方、AMY-Abの意義を明らかにする目的にて、AMYをマウスに免疫するモデルを開発中であるが、AMY cDNAをin vivo electroporation法にて免疫することにより高率に膵島炎を惹起しうることが判明した。現在、劇症１型糖尿病との関連を病理学的ならびに耐糖能の観点より解析中である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
① ELISA改良：ペプチド７によるELISAはbackgroundを改善したが、目標には達成できていない。この原因はこのペプチドが難溶性であり、このためにinterassay variationが高くなる傾向があるためである。現在種々の溶媒にて検討しているため、劇症１型糖尿病での正確な
AMY-Abの頻度・抗体価の検討に遅れが生じている。
② 膵島炎モデルマウスの解析
このモデルの作成に当初、E.coliにて産生したリコンビナントAmylaseα-2Aを抗原として使用したが、実験中にこれらに高濃度のエンドトキシンが含まれることが判明し、この影響は無視できないと考え、現在AMY-cDNAのDNA 免疫に方法を変更した。このために若干の遅れが生じているが、本法はエンドトキシンの影響を回避しうる方法であり膵島炎も生じるため、今後進展が期待される。
|
| 今後の研究の推進方策 |
① ELISA改良
ペプチド７は抗原としては優れているが、これをELISAプレートにコートするELISAでは限界があるよと考えられる。そのため、ペプチド７とβ-galactosidaseの融合蛋白の作成、ないしペプチド７に対する家兎抗体を作成に２抗体法によるRIAないしELISAでの検出を検討している。
② 膵島炎モデルマウスの解析
現在、AMY-cDNAのDNA 免疫にてモデルが作成されており、今後CXCL-10やinterferon-γなどとの関連などの解明が期待される。これらによりAMY-Abと劇症１型糖尿病の関連や他の種々の膵疾患におけるAMY-Abの意義を明らかにする予定である。
|
| 次年度の研究費の使用計画 |
改良ELISA確立のため、TEKAN社マイクロプレートリーダー（サンライズリモート）を購入予定である。
研究試薬、実験動物購入およびガラス器具等を購入する。
|
