研究課題
骨量は破骨細胞による骨吸収と骨芽細胞による骨形成とのバランスによって調節される。このバランスはホルモンやサイトカインなど細胞外の要因に影響されることはよく知られているが、細胞外プロトン(pH)も重要な役割を担っており、酸性条件下では骨吸収が亢進するといわれている。OGR1 (ovarian cancer G-protein-coupled receptor 1)、TDAG8 (T-cell death-associated gene 8)、GPR4、G2A)は細胞外のpHを感知するGタンパク質共役型受容体であり、骨芽細胞および破骨細胞でも発現している。平成24年度に行ったpQCTによる海綿骨の骨密度測定と、骨形態計測による結果を踏まえて細胞レベルでの骨代謝を明らかにする実験を行った。野生型、およびOGR1ノックアウトマウスより採取した骨髄細胞を、M-CSF、RANKLにより破骨細胞へ分化誘導を行った。播き込み細胞数、細胞の状態、分化誘導開始から評価するまでの時間を工夫し、破骨細胞のマーカーとして用いられるTRAP(酒石酸耐性酸性ホスファターゼ)と骨芽細胞のマーカーとしてのALP(骨型アルカリホスファターゼ)の活性を測定し数値化を試みた。細胞培養液中のpHを酸性(pH7.4-pH6.0)にしたときに、破骨細胞による骨吸収活性、転写因子NFATc1の核移行などの機能に着目した実験を行った。
3: やや遅れている
平成24年度には出産のため産休を取得し、仕事を中断した。このためマウスの飼育数が減ってしまって平成25年度に計画していた個体レベルでの実験に必要なマウスを供給できなかったため、平成25年度より細胞レベルでの研究について前倒しで着手し26年度には培養実験をある程度進めることができた。
本研究は、pH受容体ノックアウトマウスを用いて、個体レベルおよび細胞レベルでの研究を通してpH受容体が骨代謝でどのような役割を果たすのかを明らかにすることを試みるものである。平成25年度に計画していて十分に行えなかった病態モデルマウス血液中のマーカー、サイトカインをELISA 法により測定する。
平成24年度には出産のため産休を取得し、仕事を中断した。このため、マウスの飼育数が減り、平成25年度に予定していた骨密度の測定が十分にできていない。骨密度の測定および骨形態計測のために予定していた金額を次年度に繰り越した。
次年度使用額は骨密度測定および骨形態計測を行う予定である。骨密度の測定および骨形態計測には特殊な機器が必要なため専門の業者による測定が必要である。それ以外の実験については必要な機器や施設は揃っており設備備品の購入の予定はない。細胞培養の実験に関しては平成27年度も細胞培養実験を行うので、分化誘導にサイトカイン類が、骨代謝機能の評価として専用の培養関連器具の消耗品が必要である。
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