ＡＴＬヒト化マウスを用いた腫瘍化機構と新規同定癌幹細胞分画の解析による治療法開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24591383
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 矢持 忠徳 東京大学, 新領域創成科学研究科, 特任研究員 (80306844)
• 研究分担者: 渡辺 信和 九州がんセンター, 細胞治療科, 医長 (10334278)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: ATL / Adult T cell Leukemia / Cancer stem cell

研究実績の概要

成人T細胞白血病 (ATL) は極めて予後が不良で化学療法耐性を示す。最近このような化学療法耐性の細胞集団において癌幹細胞の存在が相次いで報告されている。我々は生着能を有する細胞集団を癌幹細胞と定義しそのような細胞集団がATLにおいて存在するか、その有無を検討した。その癌幹細胞は以下の点を満たすものと考えている。
生着能を有する細胞集団で全体の腫瘍の一部に存在するもの、その細胞集団は細胞表面マーカーで区別が出来る、さらにその細胞集団を移植すると生着能を有する細胞と有しない細胞を生み出す、そしてこれらの細胞集団は連続移植継代が可能。
我々は上の定義を満たす細胞集団としてまず免疫不全マウスへの連続移植継代株の作成を目指した。その結果、ATL患者由来PBMCから分画した細胞集団からNOJマウスにおいて複数の連続移植継代株を樹立した。それらのうちCD4+ CCR4+分画由来の連続移植継代の３代目以降において凍結保存しそこから再現を持って腫瘍再生を確認出来た。またこの連続移植継代株は一定のHTLV-1 Integration siteを保持し継代しても変化せず保持すること、さらにその際のウイルスロードは180から200%前後であることを確認している。またそれらの細胞集団のPhenotypeが継代を介してATL likeなPhenotype、(CD4+、CD25+、CCR4+、CD5+、cytoplasmic CD3+) を獲得することを確認した。さらにそこの連続移植継代株の免疫不全マウスへの移植後の生着先は肺、脾臓、肝臓、骨髄を中心にほぼ全身に確認された。つぎにATLの特徴である複雑な染色体転座の有無を検討したところ11番染色体と14番染色体に複雑な転座を有していた。以上よりこの連続移植継代株にはATL Likeな細胞集団を再生できる細胞集団が存在すると判断した。そこでこの連続移植継代株において生着能に差のある細胞集団の存在の有無を網羅的染色を用いて検討しており、複数の候補が存在していることを確認できた。

研究成果

• [雑誌論文] Advanced HTLV-1 carriers and early-stage indolent ATLs are indistinguishable based on CADM1 positivity in flow cytometry. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi S, Watanabe E, Ishigaki T, Ohno N, Yuji K, Nakano K, Yamochi T, Watanabe N, Tojo A, Watanabe T, Uchimaru K
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: Epub ahead of print ページ: 未定
  • DOI: 10.1111/cas.12639
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of TL-Om1, an ATL Cell Line, as a Reference Material for Human T-Lymphotropic Virus 1 Quantitative PCR. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kuramitsu M, Okuma K, Yamagishi M, Yamochi T, Firouzi S, Momose H, Mizukami T, Takizawa K, Araki K, Sugamura K, Yamaguchi K, Watanabe T, Hamaguchi I.
  • 雑誌名: J Clin Microbiol 巻: 53 ページ: 587-596
  • DOI: 10.1128/JCM.02254-14
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical outcomes of a novel therapeutic vaccine with Tax peptide-pulsed dendritic cells for adult T cell leukaemia/lymphoma in a pilot study (2015)
  • 著者名/発表者名: Suehiro Y, Hasegawa A, Iino T, Sasada A, Watanabe N, Matsuoka M, Takamori A, Tanosaki R, Utsunomiya A, Choi I, Fukuda T, Miura O, Takaishi S, Teshima T, Akashi K, Kannagi M, Uike N, Okamura J
  • 雑誌名: Br J Haematol. 巻: 169(3) ページ: 356-367
  • DOI: 10.1111/bjh.13302
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantification of adult T-cell leukemia/lymphoma cells using simple four-color flow cytometry (2015)
  • 著者名/発表者名: Ishigaki T, Zaike Y, Nojima M, Kobayashi S, Ohno N, Uchimaru K, Tojo A, Nakauchi H, Watanabe N.
  • 雑誌名: Clin Chem Lab Med 巻: 53(1) ページ: 85-93
  • DOI: 10.1515/cclm-2014-0183.
  • 査読あり
• [雑誌論文] HTLV-1キャリアが産生するウイルス構造蛋白質に対する抗体と末梢血中のプロウイルス量に関する解析」、 (2014)
  • 著者名/発表者名: 井上由紀子，守田麻衣子，後藤信代，相良康子，入田和男，矢持忠徳，渡邉俊樹，岩永正子，浜口功，清川博之、
  • 雑誌名: 日本輸血細胞治療学会誌 巻: 60(6) ページ: 592-599
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epigenetic deregulation of Ellis Van Creveld confers robust Hedgehog signaling in adult T-cell leukemia. 105(9):1160-1169, (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi R; Yamagishi M, Nakano K, Yamochi T, Yamochi T, Fujikawa D, Nakashima M, Tanaka Y, Uchimaru K, Utsunomiya A, Watanabe T.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 105(9） ページ: 1160-1169
  • DOI: 10.1111/cas.12480
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development and validation of a new high-throughput method to investigate the clonality of HTLV-1-infected cells based on provirus integration sites. (2014)
  • 著者名/発表者名: Firouzi S, López Y, Suzuki Y, Nakai K, Sugano S, Yamochi T, Watanabe T.
  • 雑誌名: Genome Med 巻: 6(6): ページ: 46
  • DOI: 10.1186/gm568
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] CADM1 expression and stepwise downregulation of CD7 are closely associated with clonal expansion of HTLV-1-infected cells in adult T-cell leukemia/lymphoma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi S, Nakano K, Watanabe E, Ishigaki T, Ohno N, Yuji K, Oyaizu N, Asanuma S, Yamagishi M, Yamochi T, Watanabe N, Tojo A, Watanabe T, Uchimaru K.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 巻: 20(11) ページ: 2851-2861
  • DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-13-3169
  • 査読あり
• [学会発表] Monitoring clonal composition of HTLV-1-infected cells based on provirus integration sites (2014)
  • 著者名/発表者名: Firouzi S, Yamochi T, Lopez O, Suzuki Y, Nakai K, Sugano S, Watanabe T, ”Monitoring clonal composition of HTLV-1-infected cells based on provirus integration sites
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜、横浜、
  • 年月日: 2014-11-27 – 2014-11-27
• [学会発表] HTLV-1 PVLと HLA Class I結合peptideの乖離時間との関連」、第62回日本ウイルス学会学術総会 (2014)
  • 著者名/発表者名: 相良康子、井上由紀子、守田麻衣子、後藤信代、岩永正子、矢持忠徳、渡邉俊樹、浜口功、相良康弘、清川博之、
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-11-11 – 2014-11-11
• [学会発表] CD30 expressing cells in HTLV-1 carriers reveal abnormal nuclear morphology resembling flower cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakashima M, Yamochi T, Higashihara M, Watanabe T, Horie R,
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-01
• [学会発表] Tumor-specific gene expression leads to p38 and Hedgehog signaling activation in adult T cell leukemia (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamagishi M, Takahashi R, Sakai N, Fujikawa D, Nakagawa S, Yamochi T, Yamochi T, Nakano K, Uchimaru K, Utsunomiya A, Watanabe T
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-01
• [学会発表] 12カラー・フローサイトメトリーによるATLに対する樹状細胞療法後のATL細胞と免疫細胞の同時解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 渡辺恵理、佐藤奈津子、末廣陽子、崔日承、末廣陽子、鵜池直邦、渡辺信和、
  • 学会等名: 第76回日本血液学会、
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-01
• [学会発表] Establishment of a stroma-dependent ATL cell-line and analysis of its proliferation in vivo (2014)
  • 著者名/発表者名: Tomohiro Ishigaki, Seiichiro Kobayashi, Nobuhiro Ohno, Yasunori Ota, Nobukazu Watanabe, Arinobu Tojo, Hiromitsu Nakauchi, Kaoru Uchimaru,
  • 学会等名: The 76th Annual Meeting of the Japanese Society of Hematology
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-01
• [学会発表] Putative ATL tumor initiating cellsの解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 矢持忠徳、守田陽平、矢持淑子、Sanaz Firouzi、佐々木陽介、渡辺信和、内丸薫、宇都宮與、渡邉俊樹
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-25
• [学会発表] A new high-throughput method to investigate the clonality of HTLV-1-infected cells based on provirus integration sites (2014)
  • 著者名/発表者名: Sanaz Firouzi, Tadanori Yamochi, Yosvany Lopez, Yutaka Suzuki, Kenta Nakai, Sumio Sugano, Toshiki Watanabe
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-25
• [学会発表] キメリズム解析・HLA-Flow法による臍帯血移植後の生着、ATL細胞、およびATL細胞のHLAクラスI欠失の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤奈津子、渡辺信和、渡辺恵理、崔日承、鵜池直邦
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-24 – 2014-08-24
• [学会発表] 急性型ATLにおける細胞表面抗原のクラスタリング解析とATL幹細胞マーカーの検索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 石垣智寛、小林誠一郎、大野伸広、中野伸亮、宇都宮與、山崎聡、渡辺信和、東條有伸、中内啓光、内丸薫、
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-24 – 2014-08-24
• [学会発表] CD30はHTLV-1キャリアにおける異常リンパ球に発現し、核の形態変化に関与する (2014)
  • 著者名/発表者名: 中島誠、矢持忠徳、東原正明、渡邉俊樹、堀江良一
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-23 – 2014-08-23
• [学会発表] A new high-throughput method to investigate the clonality of HTLV-1-infected cells based on provirus integration sites (2014)
  • 著者名/発表者名: Sanaz Firouzi, Tadanori Yamochi, Yosvany López, Yutaka Suzuki, Kenta Nakai, Sumio Sugano, Toshiki Watanabe
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-23 – 2014-08-23
• [学会発表] 単鎖抗体(scFv)を用いたHTLV-1感染細胞特異的miRNA輸送システムの構築 (2014)
  • 著者名/発表者名: 西田亜季、長門石曉、中野和民、山岸誠、矢持忠徳、田中勇悦、津本浩平、渡邉俊樹
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会学術集会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-23 – 2014-08-23
• [学会発表] ATLに対する臍帯血移植後のATL細胞と免疫細胞の12カラーFACS解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 渡辺信和、佐藤奈津子、渡辺恵理、崔日承、鵜池直邦
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会学術集会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-23 – 2014-08-23
• [学会発表] ATLに対する樹状細胞療法後のATL細胞と免疫細胞のマルチカラーFACS解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 渡辺恵理、佐藤奈津子、渡辺信和、末廣陽子、鵜池直邦
  • 学会等名: 第1回日本HTLV-1学会学術集会
  • 発表場所: 東京大学医科学研究所
  • 年月日: 2014-08-23 – 2014-08-23
• [学会発表] HLA-Flow法の臨床応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤奈津子、渡辺恵理、石垣智寛、渡辺信和、キメリズム解析／HLA-Flow法の臨床応用
  • 学会等名: 第24回日本サイトメトリー学会
  • 発表場所: 関西医科大学、枚方市
  • 年月日: 2014-06-28 – 2014-06-28
• [学会発表] 12カラーFCMによるATLに対する樹状細胞療法後のATL細胞と免疫細胞の同時解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 渡辺恵理、佐藤奈津子、末廣陽子、鵜池直邦、渡辺信和
  • 学会等名: 第24回日本サイトメトリー学会
  • 発表場所: 関西医科大学、枚方市
  • 年月日: 2014-06-28 – 2014-06-28