| 研究概要 |
成人T細胞白血病 (adult T-cell leukemia;ATL)症例の検体を対象に、次世代シークエンス技術を用いて遺伝子の体細胞変異の網羅的な探索をおこなう計画である。NF-κBを中心としたシグナル伝達の活性化における分子学的機序の解明を目的に、次世代シークエンサーによって網羅的な変異の解析を開始した。ATLの患者から文書による同意を得た後に、検体を採取し、次世代シークエンサー GS Junior Bench Top System (Roche Diagnostics)を用いてexomeの解析をおこなう。これまでに、BCL11B, A20, MYD88, CARD11、BCL10, MALT1, TRAF5などの遺伝子解析を行い、一部の遺伝子では複数の症例で変異が確認された。一方でNF-κBの活性化については同時にelectrophoretic mobility shift assay (EMSA) などにより解析をした。
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| 今後の研究の推進方策 |
次世代シークエンサーによる探索を継続しておこなう。
これまでのスクリーニングで候補となった遺伝子変異については、その機能解析を、in vitroにて並行しておこなう。候補の遺伝子変異をクローニングし、Ba/F3などの細胞株へレトロウイルスベクターを用いて遺伝子導入し、EMSA, Western blotting, luciferase reporter assayなどによりシグナルの活性化について確認する。また、遺伝子導入した細胞株でMTT assayによる細胞増殖試験やAnnexin-V染色でのアポトーシス解析をおこない、これらへの影響を検討する。さらに、siRNAを用いて候補遺伝子のノックダウンによる機能解析もおこなう。
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