ＣＡＰ１遺伝子変異による急性骨髄性白血病の発症や再発機序の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24591412
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 山口 博樹 日本医科大学, 医学部, 准教授 (90297937)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: CAP1 / 急性骨髄性白血病 / 遺伝子変異

研究実績の概要

本研究はCAP1変異を認めるAMLの臨床的特徴や、CAP1変異の白血病発症や再発の機序を明らかにすることを目的としている。
オリゴ合成にてwild typeのCAP1cDNAを合成し、AML症例で発見されたCAP1変異をwild type CAP1cDNAよりPCR法とmutagenesis法を基にクローニングした。そしてCAP1GFP発現AcGFP1ベクターでCAP1のwild typeとmutant typeを発現させたHela細胞、 HEK293T細胞、ヒト血球系GM‐CSF依存性細胞株のMO7e細胞やF-36P細胞を作製した。
CAP1のwild typeとmutant typeを発現させたそれぞれの細胞に対してStaurosporin(STS)やetoposideにてアポトーシスを誘導しCAP1の細胞内局在を免疫染色法と細胞分画ごとのwestern blottingで検討したところ、wild typeはアポトーシスを誘導で細胞質からミトコンドリアに局在が変化をしたが、mutant typeは細胞質から移動しなかった。
Hela細胞に対してwild type CAP1に対するshRNAを2か所に設定し、pRNA-U6.1/NeoにてshRNAを導入し、90%以上knockdownされたクローンを作成した。そしてHela細胞にwild type、mutant type、wild/mutant type(1:1)のCAP1-GFPを発現させ、STSにて処理を行いアポトーシスの誘導をした。wild typeと比較してROSの蓄積、cytochrome c放出のwestern blotting、Caspase-3/7の活性はwild/mutant type(1:1)で1/2以下、mutant typeで1/5以下しかアポトーシスが誘導されてないことが示された。

研究成果

• [雑誌論文] nhibition of S100A6 induces graft versus leukemia effects in MLL/AF4-positive ALL in human PBMC-SCID mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tamai.H, Miyake K, Yamaguchi H, Shimada T, Dan K, Inokuchi K.
  • 雑誌名: Bone Marrow Transplantation 巻: 49(5) ページ: 699-703
  • DOI: 10.1038/bmt.2014.18. Epub 2014 Mar 3.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Granulocyte colony-stimulating factor combined regimen in cord blood transplantation for acute myeloid leukemia: a nationwide retrospective analysis in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: 1.Konuma T, Ooi J, Uchida N, Ogawa H, Ohashi K, Kanamori H, Aotsuka N, Onishi Y, Yamaguchi H, Kozai Y, Nagamura-Inoue T, Kato K, Suzuki R, Atsuta Y, Kato S, Asano S, Takahashi S.
  • 雑誌名: Haematologica 巻: 99(12) ページ: e264-8
  • DOI: 10.3324/haematol.2014.114504. Epub 2014 Sep 12.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 急性骨髄性白血病とエピジェネティクス制御関連遺伝子変異 (2014)
  • 著者名/発表者名: 脇田知志、山口博樹
  • 雑誌名: 日本臨床 巻: 72(6) ページ: 1026-1032
• [学会発表] The prognostic and clinical feature of HSCT patients with chemotherapy refractory acute myeloid leukemia (2015)
  • 著者名/発表者名: Keiko Fukunaga, Hiroki Yamaguchi, Yusuke Fujiwara, Shunsuke Yui, Takeshi Ryotokuji, Tsuneaki Hirakawa, Masahiro Okabe, Satoshi Wakita, Hayato Tamai, Muneo Okamoto, Kazutaka Nakayama, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 第37回 日本造血細胞移植学会総会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-03-05 – 2015-03-07
• [学会発表] Decision Analysis of Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation Versus Chemotherapy in Cytogenetically Standard-Risk Acute Myeloid Leukemia in First Complete Remission: The Impact of FLT3-ITD Profile (2014)
  • 著者名/発表者名: Saiko Kurosawa, Hiroki Yamaguchi, et al.
  • 学会等名: 56rd American Society of Hematology
  • 発表場所: San Francisco, USA
  • 年月日: 2014-12-06 – 2014-12-08
• [学会発表] The D816V c-kit mutation confers higher proliferation activity by JAK-STAT and Src family kinase pathways compared to N822K c-kit mutation in core-binding factor acute myeloid leukemia (2014)
  • 著者名/発表者名: Ikuko Omori, Hiroki Yamaguchi, Tomoaki Kitano, Noriko Miyake, Koichi Miyake, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 56rd American Society of Hematology
  • 発表場所: San Francisco, USA
  • 年月日: 2014-12-06 – 2014-12-08
• [学会発表] The prognostic impact of cytogenetic and genetic abnormality for the achievement of the second complete remission in adult patients with acute myeloid leukemia (2014)
  • 著者名/発表者名: Keiko Fukunaga, Hiroki Yamaguchi, Satoshi Wakita, Ikuko Omori, Shunsuke Yui, Takeshi Ryotokuji, Tsuneaki Hirakawa, Kunihito Arai, Tomoaki Kitano, Fumiko Kosaka, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] The clinical features of PTPN11 gene mutation in Japanese patients with de novo AML (2014)
  • 著者名/発表者名: Shunsuke Yui, Hiroki Yamaguchi, et al
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] The clinical features and prognostic impact of acute myeloid leukemia with Epigenetics Modifying Gene mutation (2014)
  • 著者名/発表者名: Anna Kobayashi, Hiroki Yamaguchi, Kensuke Usuki, Yutaka Kobayashi, Kenji Tajika, Gomi Seiji, Makoto Watanabe, Kentaro Azuma, Yuko Sato, Takahiro Todoroki, Ikuko Omori, Fukunaga Keiko, Satoshi Wakita, Tsuneaki Hirakawa, Takeshi Ryotokuji, Kunihito Arai, Tomoaki Kitano1, Fumiko Kosaka, Hayato Tamai, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] The clinical features and prognostic impact of de novo acute myeloid leukemia with WT1mutation (2014)
  • 著者名/発表者名: Makoto Watanabe, Hiroki Yamaguchi, Kensuke Usuki, Yutaka Kobayashi, Kenji Tajika, Seiji Gomi, Anna Kobayashi, Kentaro Azuma, Yuko Sato, Takahiro Todoroki, Ikuko Omori, Fukunaga Keiko, Satoshi Wakita, Tsuneaki Hirakawa, Takeshi Ryotokuji, Kunihito Arai, Tomoaki Kitano, Fumiko Kosaka, Hayato Tamai, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] THE DIFFERENCE OF RCSD1-ABL1- LEUKEMOGENICITY BETWEEN EXON3 OF RCSD1/EXON 4 OF ABL1 AND EXON 2 OF RCSD1/EXON 4 OF ABL1 (2014)
  • 著者名/発表者名: Hayato Tamai , Koichi Miyake, Hiroki Yamaguchi, Kazuo Dan, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: 19th. European Hematology Association
  • 発表場所: Milan, Italy
  • 年月日: 2014-06-12 – 2014-06-15
• [学会発表] The prognostic impact of cytogenetic and genetic abnormality for the achievement of the second complete remission in adult patients with acute myeloid leukemia after first relapse (2014)
  • 著者名/発表者名: Keiko Fukunaga, Hiroki Yamaguchi, Satoshi Wakita, Ikuko Omori, Shunsuke Yui, Takeshi Ryotokuji, Tsuneaki Hirakawa, Kunihito Arai, Tomoaki Kitano, Fumiko Kosaka, Kazuo Dan, Koiti Inokuchi.
  • 学会等名: 19th. European Hematology Association
  • 発表場所: Milan, Italy
  • 年月日: 2014-06-12 – 2014-06-15
• [学会発表] The prognostic impact of cytogenetic and genetic abnormality for the achievement of the second complete remission in adult patients with acute myeloid leukemia (2014)
  • 著者名/発表者名: Keiko Fukunaga, Hiroki Yamaguchi, Satoshi Wakita, Ikuko Omori, Shunsuke Yui, Takeshi Ryotokuji, Tsuneaki Hirakawa, Kunihito Arai, Tomoaki Kitano, Fumiko Kosaka, Kazuo Dan, Koiti Inokuchi
  • 学会等名: The 6th JSH International Symposium
  • 発表場所: 浜松
  • 年月日: 2014-05-23 – 2014-05-24