| 研究課題/領域番号 |
24591464
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| 研究機関 | 愛媛大学 |
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研究代表者 |
長谷川 均 愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40164826)
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| キーワード | 寛容型樹状細胞 / 制御性T細胞 |
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| 研究概要 |
近年免疫寛容樹状細胞（tDCs）が注目されており、自己免疫，移植免疫において免疫寛容を導き、細胞治療への応用が期待されている。生理活性脂質、核内受容体リガンド、キナーゼ阻害剤ライブラリーからのスクリーニングから、tDCsを誘導する物質として、Cキナーゼ阻害剤(PKCI)を得た。PKCIにて誘導した樹状細胞(PKCI-DCs)の特徴を報告する。【材料と方法】ヒト末梢血CD14陽性細胞から、GM-CSF，IL-4を加え、5日間培養にて未熟DCsを作成し、さらに2日間、TNF-alpha，IL-1beta，PGE2の成熟誘導カクテルを加えて成熟DCsを誘導した。その成熟過程においてPKCIを加え、tDCsを誘導した。さらに、今まで報告されているtDCsを誘導する物質，IL-10, TGF-beta、VitD3、Dex, rapamycin, PPARgamma＋retinoic acidと PKCI-DCsとの比較を行った。また、マウスPKCI-DCsを作成し、GVHDモデルマウスを用いて、PKCI-DCsのin vivoでの効果を検討した。
【結果】ヒトPKCI-DCsの表面マーカーはCD40，CD80，CD83，CD86，MHC class Iの発現は低下していた。また、CCR7の発現も比較的高く維持されており、IL-10とTGF-betaのサイトカイン産生が著しく増加していた。さらに、PKCI-DCsと共培養したT細胞は増殖能が低下しており、またIL-10，Foxp3の発現細胞が有意に増加していた。また、炎症環境下において、PKCI-DCsは安定であった。機序に関しては、PKCI存在下ではNF-kappaBの発現の低下と細胞内cAMPの上昇が認められ、tDCsが誘導されることが明らかになった。PKCIと他の誘導物質によって作成したtDCsを比較したところ、T細胞の抑制能、抑制性のサイトカインの産生、遊走能を満たす物質として、単独ではPKCIが有力であった。GVHDマウスモデルマウスにPKCI-DCsを投与したところ、GVHDは有意に抑制でき、生存期間の延長が確認できた。ex vivoだけでなくin vivoにおいても免疫寛容作用を保つことが示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
１）Cキナーゼ阻害剤（PKCI）を用いた安定性のあるヒト免疫寛容樹状細胞（tDCs）の作製に成功した。２）PKCIによるtDCsの誘導機序に関しても解析できた。３）マウスPKCI-DCsを作成でき、ヒトPKCI-DCsとほぼ同様な性質を持つことが示された。４）PKCI-DCsをGVHDマウスモデルマウスに投与したところ、GVHDは有意に抑制でき、in vivoにおいてもPKCI-DCsは免疫寛容に働くことが示された。５）PKCIと他の誘導物質によって作成したtDCsを比較したところ、T細胞の抑制能、抑制性のサイトカインの産生、遊走能を満たす物質として、単独ではPKCIが有力であることが判明した。
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| 今後の研究の推進方策 |
１）PR3-ANCA関連血管炎患者から誘導したPKCI-DCsを用いて、PR3-ANCAに対する抗原特異的制御性Ｔ細胞の作成をin vitroで行っており、その性質の解析を行う。２）免疫抑制系DCへ分化誘導を促進させる物質を数多く単離している。それらのうち、２，３の物質を解析する予定である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
現在、PR3-ANCA関連血管炎患者から、PR3-ANCAに対する抗原特異的制御性Ｔ細胞の作成を行っているが、まだ完全に作成できていない。このため、一部の研究費を次年度に繰り越す。次年度も研究計画書の通りに、研究費を使用し、研究を遂行していく予定である。
試薬類や培養液に充当予定。
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