中和単クローン抗体パネルを用いたＨＩＶ感染の治癒に向けた研究

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24591484
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 松下 修三 熊本大学, エイズ学研究センター, 教授 (00199788)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 中和抗体 / ウイルス / 動物モデル

研究実績の概要

抗体の可変部位を分子クローニングする新しい方法を用いて、HIV-1非サブタイプB感染症例から、新規単クローン抗体を分離し、有効なAIDSワクチン開発に貢献すること、および、cART治療下に残存するHIV-1産生細胞を排除する治療戦略の基礎研究として、抗体依存性細胞傷害活性（ADCC）に関して臨床分離株を標的としたアッセイシステムを構築し、有効な抗体反応を同定することが本研究の目的である。
1．昨年までの研究で、広範囲の中和抗体活性を示すCRF01_AE感染症例を同定した。該当症例の末梢血単核球からメモリーB細胞を分離、EBVで形質転換後にクローニングした。培養上清をCRF01_AE envelope発現細胞にてスクリーニングし、特異的結合活性が見られたクローンについてsubtype AE, A, B及びCへの交差反応性を検討し、候補となった複数のクローンからRNAを抽出し、Oligo(dT)プライマーと逆転写酵素でcDNAを作製した。これを鋳型として抗体の重鎖、軽鎖のV領域を特異的に増幅後クローニングし、組み換え抗体を作成して、活性の測定とエピトープの同定を行っている。
2． ADCC活性に関しては、サブタイプB感染例由来の抗体パネルを用いて検討した。SF2,BaL,YU2など研究室で用いられる株ばかりでなく、5種類の初感染株（transmitted /founder virus）を用いspinoculationという方法で、CEM-NKR 細胞にHIVを感染させ標的細胞とした。これらの臨床分離株に対するADCC活性を調べると、我々が作成した12種類の抗体パネルの中のどれかが必ずADCC活性を示し、ポリクローナルな抗体反応が重要であることを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] Passive transfer of neutralizing monoclonal antibody KD-247reduces plasma viral load in patients chronically infected with HIV-1. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S., Yoshimura, K., Ramirez, K.P., Pisupati, J., Murakami, T.
  • 雑誌名: AIDS 巻: 29 ページ: 453-462
  • DOI: 10.1097/QAD.0000000000000570
  • 査読あり
• [雑誌論文] Complementary and synergistic activities of anti-V3, CD4bs and CD4i antibodies derived from a single individual can cover a wide range of HIV-1 strains. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ramirez, K.P., Kuwata, T., Maruta, Y, Tanaka K., Muntasir, A., Yoshimura, K., Matsushita, S.
  • 雑誌名: Virology 巻: 475 ページ: 187-203
  • DOI: 10.1016/j.virol.2014.11.011
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Structural basis of clade-specific HIV-1 neutralization by humanized anti-V3 monoclonal antibody KD-247. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kirby, K.A., Ong Y.T., Hachiya, A., Laughlin, T.G.,Chiang, L.A., Pan Y., Moran, J.L., Marchand, B.,Singh, K., Gallazzi, F., Quinn, T.P., Yoshimura, K., Murakami, T., Matsushita S., Sarafianos, S.G.
  • 雑誌名: The FASEB Journal 巻: 29 ページ: 1-11
  • DOI: 10.1096/fj.14-252262
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Impact of maraviroc-resistant and low-CCR5- adapted mutations induced by in vitro passage on sensitivity to anti-envelope neutralizing antibodies. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshimura, K., Harada, S., Boonchawalit, S., Kawanami, Y., Matsushita, S.
  • 雑誌名: J. Gen. Virol. 巻: 95 ページ: 1816-1826
  • DOI: 10.1099/vir.0.062885-0
  • 査読あり
• [学会発表] Enhanced Neutralization of HIV-1 with Fusion Inhibitor Resistant Mutations. The annual Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections (CROI 2015). (2015)
  • 著者名/発表者名: Muntasir, A., Kuwata, T., Ramirez, K., Maruta, Y., Tanaka K., Shimura, K., Oishi, S., Fujii, N., Matsuoka, M., Matsushita, S.
  • 学会等名: The annual Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections (CROI 2015).
  • 発表場所: the Washington State Convention Center(Seattle, Washington, USA.)
  • 年月日: 2015-02-23 – 2015-02-26
• [学会発表] Therapeutic application of neutralizing antibodies based on the recent data on complementary and synergistic activities against a wide range of HIV-1 strains. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S., Ramirez, K.P., Maruta, Y., Tanaka, K., Muntasir, A., Kuwata, T., Pisupait, J., Murakami, T., Yoshimura, K.
  • 学会等名: the 17th International Conference on Emerging Infectious Diseases (EID) Emerging Infectious Diseases Meeting
  • 発表場所: Building of Humanities and Social Sciences, Academia Sinica(Taipei, Taiwan)
  • 年月日: 2015-01-26 – 2015-01-27
• [学会発表] Mechanism of post-attachment neutralization of single-chain variable fragment (scFv) from anti-V3 monoclonal antibody with cross-reactivity. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maruta, Y., Kuwata, T., Tanaka, K., Nakahara,Y., Ramirez, K., Alam, M., Egami, Y., Hirata, I., Suwa, Y., Morioka, H., Matsushita, S.
  • 学会等名: Korea-Japan Joint Seminar on HIV/AIDS.
  • 発表場所: 熊本大学山崎記念会館（熊本市）
  • 年月日: 2015-01-10 – 2015-01-10
• [学会発表] Complementary effect of anti-V3, CD4bs and CD4i antibodies accounts for cross-neutralizing and non-neutralizing activities against HIV-1. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ramirez, K.P., Kuwata, T., Maruta, Y, Tanaka K., Muntasir, A., Yoshimura, K., Matsushita, S.
  • 学会等名: 第28回日本エイズ学会学術集会・総会.
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪市）
  • 年月日: 2014-12-03 – 2014-12-05
• [学会発表] V3エピトープへの交叉反応性をもつ中和抗体の遺伝子組み換えによる小型化の試み (2014)
  • 著者名/発表者名: 江上由華、丸田泰広、田中和樹、Muntasir A., Ramirez K., 桑田岳夫、松下修三.
  • 学会等名: 第28回日本エイズ学会学術集会・総会.
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪市）
  • 年月日: 2014-12-03 – 2014-12-05
• [学会発表] Mechanism of post-attachment neutralization of single-chain variable fragment (scFv) from anti-V3 monoclonal antibody against HIV-1 (2014)
  • 著者名/発表者名: Maruta, Y., Kuwata, T., Tanaka, K., Nakahara,Y., Ramirez, K., Alam, M., Egami, Y., Hirata I., Suwa, Y., Morioka, H., Matsushita, S.
  • 学会等名: HIV R4P 2014
  • 発表場所: Cape Town International Convention Centre(Cape Town, South Africa)
  • 年月日: 2014-10-28 – 2014-10-31
• [学会発表] Therapeutic application of neutralizing antibodies based on the recent data on complementary and synergistic activities against a wide range of HIV-1 strains. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S., Ramirez, K.P., Maruta, Y., Tanaka, K., Muntasir, A., Kuwata, T., Pisupait, J., Murakami, T., Yoshimura, K.
  • 学会等名: 15th Kumamoto AIDS Seminar.
  • 発表場所: ホテル日航熊本（熊本市）
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Evaluation of complementarity and synergy of conventional anti-HIV-1 antibodies derived from a single individual (2014)
  • 著者名/発表者名: Ramirez, K.P., Kuwata, T., Maruta, Y, Tanaka, K., Muntasir, A., Yoshimura, K., Matsushita, S.
  • 学会等名: 15th Kumamoto AIDS Seminar
  • 発表場所: グランヴィリオホテル（阿蘇市）
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Mutations in gp41 that confer resistance to fusion inhibitors enhance the neutralization sensitivity to antibodies against both gp41 and gp120. (2014)
  • 著者名/発表者名: Muntasir, A., Kuwata, T., Ramirez, K., Enomoto, I., Maruta, Y., Tanaka, K., Rahman, K., Nakahara, Y., Egami, Y., Kawanami, Y., Murayama, H., Shimura, K., Matsuoka, M., Matsushita, S.
  • 学会等名: 15th Kumamoto AIDS Seminar
  • 発表場所: グランヴィリオホテル（阿蘇市）
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Mechanism of post-attachment neutralization of single-chain variable fragment (scFv) from anti-V3 monoclonal antibody against HIV-1. (2014)
  • 著者名/発表者名: Maruta, Y., Kuwata, T., Tanaka, K., Nakahara,Y., Ramirez, K., Alam, M., Egami, Y., Hirata I., Suwa, Y., Morioka, H., Matsushita, S.
  • 学会等名: 15th Kumamoto AIDS Seminar.
  • 発表場所: グランヴィリオホテル（阿蘇市）
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Construction of neutralizing antibody fragment against V3 with a broad cross-reactivity. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tanaka K., Kuwata, T., Maruta, Y., Ramirez, K., Muntasir, A., Egami, Y., Enomoto, I., Kawanami, Y., Matsushita, S.
  • 学会等名: 15th Kumamoto AIDS Seminar
  • 発表場所: グランヴィリオホテル（阿蘇市）
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Passive transfer of neutralizing monoclonal antibody KD-247 reduces plasma viral load in patientschronically infected with HIV-1: a phase-1b clinical study of a humanized monoclonal antibody KD-247 (KD-1002). (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S., Yoshimura, K., Maeda, T, Murakami, T. KD-1002 Principal Investigators and The Protocol Team of Quintiles.
  • 学会等名: 7th IAS Conference on HIV Pathogenesis, Treatment and Prevention
  • 発表場所: Kuala Lumpur Convention Centre (Kuala Lumpur, Malaysia)
  • 年月日: 2014-06-30 – 2014-07-03
• [学会発表] Passive transfer of neutralizing monoclonal antibody KD-247 reduces plasma viral load in patients chronically infected with HIV-1：A Phase-1b clinical study of a humanized monoclonal antibody KD-247 (KD-1002) (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S.
  • 学会等名: IAS Towards an HIV Cure Symposium
  • 発表場所: The Banquet Hall, Rits Carlton Hotel(Kuala Lumpur, Malaysia)
  • 年月日: 2014-06-29 – 2014-06-30
• [備考] 熊本大学エイズ学研究センター松下プロジェクト研究室
  • URL: http://matsushita-lab.kumamoto-univ.jp