| 研究概要 |
我々は、11p15転座を有するAMLにおいてNUP98遺伝子が関与して、それらが正常造血に必須の転写因子であるHOX遺伝子と融合することを見出した。また、白血病化に寄与する遺伝子変異の解析を行ってきた結果、NUP98-HOX融合遺伝子を有したAMLに高頻度に認められる遺伝子異常（FLT3-ITD, NRAS変異、WT1変異）を同定し、予後との関連を明らかにした。本研究では、NUP98-HOX融合遺伝子とこの融合遺伝子を有するAMLに認められた遺伝子異常が協調することで白血病化にどのように影響を及ぼすかを明らかにする。
本年度は、NUP98-HOXA9融合遺伝子およびFLT3-ITD変異体以外に、NRAS遺伝子変異体およびWT1遺伝子変異体を作成した。それぞれの変異体をIL3依存性マウス細胞株32D細胞に遺伝子導入した。また、NUP98-HOXA9遺伝子とFLT3-ITD, NRAS, WT1変異体をそれぞれco-transfectionした。その際、それぞれの変異体のベクターが恒常的に発現できるようにIR/MAR遺伝子増幅法を用いた。具体的には、IR/MAR配列を有したベクターと目的のベクターを32D細胞にco-transfectionして、薬剤選択でクローニングした後、限界気希釈法で高発現クローンを選別した。この高発現クローン株を作成する一方、Mock-vector、cector-freeのBaF3細胞株を用いて、細胞増殖能（MTT assay）、細胞周期（FACS）、アポトーシス（FACS, immunofluorescence）、分化能（FACS, morphology）自己複製能（methl cellulose assay）、Autophagy(staining, FACS)の予備実験を行い、それぞれの実験系を確立した。
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| 今後の研究の推進方策 |
樹立した7つの細胞株を用いて、細胞増殖能（MTT assay）、細胞周期（FACS）、アポトーシス（FACS, immunofluorescence）、分化能（FACS, morphology）自己複製能（methl cellulose assay）、Autophagy(staining, FACS)を検討する。
また、これらの細胞株をBALB/cマウスに移植し、急性白血病の進行度を生存率と病理学的に比較する。さらに2次移植を行い、これらの遺伝子異常による白血病の自己複製能および増殖能を検討する。
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