| 研究概要 |
我々は、11p15転座を有するAMLにおいてNUP98遺伝子が関与して、それらが正常造血に必須の転写因子であるHOX遺伝子と融合することを見出した。また、白血病化に寄与する遺伝子変異の解析を行ってきた結果、NUP98-HOX融合遺伝子を有したAMLに高頻度に認められ
る遺伝子異常（FLT3-ITD, NRAS変異、WT1変異）を同定し、予後との関連を明らかにした。本研究では、NUP98-HOX融合遺伝子とこの融合遺伝子を有するAMLに認められた遺伝子異常が協調することで白血病化にどのように影響を及ぼすかを明らかにする。
本年度は、遺伝子を持続的に高発現するIR/MAR配列をもったベクターに組み込んだNUP98-HOXA9融合遺伝子(NH9)、FLT3-ITD変異体(FLT3-ITD)、NRAS遺伝子変異体(NRAS-MT)およびWT1遺伝子変異体(WT1-MT)をそれぞれtransfectしたIL3依存性マウス細胞株32D細胞、およびNH9とFLT3-ITD, NRAS-MT, WT1-MTをそれぞれco-transfectした32D細胞を限界希釈法でモノクローン化することに成功した。その細胞を用いて以下の実験を行った。
IL3を除いた細胞増殖能（MTT assay）では、FLT3-ITD, NH9/NRAS-MT, NH9/WT1-MTが有意に増殖能が高かった。自己複製能を調べるためにコロニー形成能（methl cellulose assay）を検討したところ、NH9/RRAS-MTが他の細胞に比べて優位にコロニー形成数が多かった。細胞死を検討するために、アポトーシス（FACS）で検討したところ、NH9, FLT3-ITD, NRAS-MT, WT1-MT、co-transfectionした細胞はアポトーシスが低下した。細胞分化を調べるために分化能（FACS, morphology）を検討したところ、FLT3-ITD, NRAS-MTおよびco-transfectionした細胞は分化能が低下した。
さらに、NOD-SCIDマウスを用いた移植実験系を確立することができた。
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