| 研究課題/領域番号 |
24591627
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
中村 好貴 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (00448292)
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| 研究分担者 |
武藤 正彦 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40175625)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | malignant melanoma / heat shock factor 1 |
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| 研究概要 |
メラノーマ細胞株であるMeWoにアデノウイルスを感染させHSF1をノックダウンした後に、細胞を6cm dishに播種し、人工的な創を作成しWound healing assayを行った。コントロールを感染させた細胞と比べ、HSF1をノックダウンしたMeWoでは創が閉じるスピードが低下することを確認した。他のメラノーマ細胞株であるHMV-I、HMV-IIでも同様の結果を確認している。
また、遊走能、浸潤能を検討するために、BD BioCoatを用いて、Migration assay, Invasion assayを行った。コントロールを感染させた細胞と比べ、HSF1をノックダウンしたMeWoでは遊走能、浸潤能ともに低下することを確認した。他のメラノーマ細胞株であるHMV-I、HMV-IIでも同様の結果を確認している。
また、メラノーマ細胞株であるHMV-Iにおいて、HSF1をノックダウンした後にHSF1を再び発現させWound healing assay、Migration assay、Invasion assayを行った。HSF1を再び発現させたHMV-Iでは、HSF1をノックダウンしたものと比べ、遊走能、浸潤能ともに回復することを確認した。
以上の結果より、HSF1がメラノーマの遊走能、浸潤能に非常に重要であることを確認した。HSF1のターゲット遺伝子の同定、メラノーマ組織におけるHSF1の発現量についての検討は同時に進行し、解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現在までに、HSF1がメラノーマの遊走能、浸潤能に非常に重要であることをin vitroの実験で確認することができた。HSF1のターゲット遺伝子の同定、メラノーマ組織におけるHSF1の発現量についての検討は同時に進行し、解析を行っており、順調に結果を出すことができている。実験の進行は研究計画に沿って、おおむね順調に進展していると考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
in vitroの実験においてHSF1がメラノーマの遊走能、浸潤能に非常に重要であることを確認した。今後はこの結果をnude mouseを用いたin vivoの実験で確認する予定である。nude mouseにHSF1をノックダウンしたメラノーマ細胞株を皮下に移植し、コントロールと比較し、増殖能が低下するかどうかを腫瘍径を測定し確認する。移植後１ヶ月後にmouseを安楽死させ、肺、肝臓を取り出し、転移したメラノーマを病理組織学的に検討する。in vitoroの結果からHSF1をノックダウンしたメラノーマ細胞を移植したmouseでは転移能が低下していると考えられる。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
該当なし
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