研究課題
本研究計画では、遺伝子組換え技術により細胞動態を可視化できる細胞株を樹立し、培養によるin vitro発毛システムを用いて発毛を可視化・解析し、発毛現象を解明することを目的とする。平成24年度（初年度）は、発毛の細胞材料（皮膚上皮幹細胞EpSCsと毛乳頭細胞DPCs）の準備、培養を行った。さらに、発毛現象を可視化・解析するにために、遺伝子組換え技術を用いて、EpSCsとDPCsに遺伝子導入した細胞株を作成した（EpSCs：赤色蛍光タンパク質発現細胞、DPCs：緑色蛍光タンパク質発現細胞）。これらの細胞は、細胞動態をリアルタイムで観察可能であった。平成25年度（次年度）は、in vitro発毛システムにより発毛現象の可視化・動態解析を行った。種々の培養液を用いてEpSCsとDPCsを混合培養し（in vitro発毛システム）、ある条件下で毛包様組織体を得ることができた。EpSCsとDPCsの細胞動態を蛍光により追跡し、細胞の分化プロセスを詳細に解析した結果、ある種のWntが分化を促進させ、いっぽうで別のWntは細胞増殖活性を亢進させる働きがあることを明らかにした。また、リアルタイムPCRおよび遺伝子発現arrayによる解析結果から、発毛現象に関わる種々の遺伝子発現が顕著に変化していることも明らかになった。平成26年度（最終年度）は、in vivoにおける発毛現象の可視化・動態解析を更に進めることで、より生理的環境下での発毛現象を解明する。
2: おおむね順調に進展している
研究計画に基づき、期待した実験成果が得られており、学会発表および論文発表での成果報告を行っているため。
最終年度（平成26年度）では、in vivoにおける発毛現象の可視化・動態解析を更に進めることで、より生理的環境下での発毛現象を解明する。具体的には、平成24、25年度に得られた成績を基に、更に詳細な解析を行う。発毛の鍵となる2つの細胞（EpSCsとDPCs）の状態・状況をin situシステムあるいはin vivo移植システムにより追跡し、毛包組織内あるいは皮内においてどの細胞がどういった影響を受けるのかを詳細に解析する。また各種Wntを用いて、正常な発毛に対しどういった影響を及ぼすかを生理的条件下で解析し、発毛に関わるWntの意義を検証する。解析としては、追跡した細胞を蛍光で検出すると同時に、組織切片などによる免疫組織化学的解析やレーザーマイクロダイセクション（LMD）により細胞分取し、Wntシグナル関連リアルタイムPCRおよびDNA arrayにより解析することで、発毛現象におけるWntの作用を解明する。
本研究計画の後半（平成25後期－26年度）において、発毛に関わる遺伝子変化を詳細に解析する目的で、DNA array等、受託研究費および抗体などの消耗品購入が予想された。それらは高額になると考えられたため、本研究計画の前半（平成24年度－25年度前期）の研究費用をできるだけ抑えるように腐心した。平成24、25年度は、細胞材料の準備やその維持のために、培養液やプラスチックシャーレ等の消耗品購入費用が生じ、さらにリアルタイムPCRなど分子生物学的解析の費用も生じたが、計画的かつ必要最小限の量を購入することで、繰越金を捻出した。本年度（平成26年度）、DNA arrayなどの受託研究費、in vivo移植実験をはじめとする動物実験に関わる費用などが発生することも鑑み、繰越金を使用して更なる解析を進める。その際、本研究計画の前半に購入した消耗品を継続して使用することや、実験に必要な物品を計画的に追加購入することで、研究を遂行する。
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