| 研究課題/領域番号 |
24591885
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 研究機関 | 福島県立医科大学 |
|---|
研究代表者 |
清水 裕史 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (70553709)
|
|---|
| 研究分担者 |
齋藤 敬弘 福島県立医科大学, 医学部, 博士研究員 (00566812)
山下 方俊 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (20381387)
石井 証 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (40468129)
伊勢 一哉 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (90363746)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| キーワード | 1型糖尿病 / 膵島移植 / 細胞シート / 血管新生 / 膵島再生 |
|---|
| 研究概要 |
【目的】我々は、1型糖尿病に対する膵島移植研究において、組織工学の応用により膵島細胞シートを発明した(Biomaterials. 30:5943-9,2009)。これまで、ラット膵島細胞シートにおける免疫不全糖尿病マウスでの治療効果が証明されている。今後のヒトへの応用を視野に入れ、ブタ膵島を用いた膵島細胞シートの構築を行うと共に、移植後の血流再分布および膵島機能向上を目指し、血管内皮細胞および膵管上皮細胞を膵島細胞シートと積層化した複合型新生膵島組織の作成を目的とした。
【方法】実験1：ブタ膵臓より得た分離膵島を、トリプシン処理にて細胞へ単離し、温度応答性培養皿にて接着培養する。培養2日目に培養温度を20℃に変化させることにより、膵島細胞をシートとして回収する。実験2：摘出したラット膵臓を培養し、培養皿表面に残存した紡錘状細胞を回収して、温度応答性培養皿へ継代しシートとして回収する。実験3：ラット血管内皮細胞を温度応答性培養皿上に播種し、confluencyの状態からシート状に回収する。
【結果】ブタ膵臓から膵島へ分離し、その後膵島細胞へ単離し得た。また、培養後の低温処理にて細胞シートとして回収することが可能であった。一方、ラット膵臓の培養では、若干の紡錘形細胞が見られたが、シート化するまでの増殖は得られず、膵管上皮単離の確認は出来なかった。ラット血管内皮細胞は温度応答性培養皿上でconfluencyの状態が得られ、低温処理によりシート状に回収し得た。
【考察】ブタ膵島細胞の分離・培養および、低温処理によるシート状回収が可能であった。膵管上皮細胞の回収には、分離および培養条件の更なる工夫が必要である。また、血管内皮細胞はシート化が確認され、膵島細胞シートとの積層化シートにおける重要な構成要素として期待出来ると考えられた。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ブタ膵島細胞から単離した膵島細胞は、温度応答性培養皿上で接着培養が可能であり、細胞シートの作成および回収も順調であった。一方、膵管上皮細胞の単離には多くの試行が必要とされる可能性があり、まずラットでの実験を行った。膵管上皮細胞の培養増殖を得るためには、培養条件、期間、観察および評価方法を、さらに詰めていく必要がある。血管内皮細胞も、膵管上皮細胞と同様の理由でラットでの実験を行った。血管内皮細胞は、温度応答性培養皿上で接着培養が可能であり、細胞シートの作成および回収も順調であった。
|
| 今後の研究の推進方策 |
ブタ膵島細胞シートと血管内皮細胞シートの積層化による移植実験が可能であると考えられる。培養条件、期間および積層化の手順を策定し、糖尿病マウスへの移植実験へつなげる。また、膵管上皮細胞の単離、培養においては、様々な条件下での培養実験を進め、シート化を目指す。
|
| 次年度の研究費の使用計画 |
該当なし
|
