胆管癌におけるポリコーム蛋白の発現意義とエピジェネティック治療への応用

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24592033
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 近本 亮 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (10419640)
• 研究分担者: 岡部 弘尚 熊本大学, 医学部附属病院, 助手 (40573621) ; 別府 透 熊本大学, 医学部附属病院, 教授 (70301372)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: Zeste Homolog 2 / Cholangiocarcinoma / 3-deazaneplanocin A / gemcitabine / epigenetics / cell cycle

研究実績の概要

【背景】 EZH2はポリコーム蛋白群の一つであり、ヒストン3リジン27 (H3K27)をトリメチル化することで遺伝子発現を抑制し、癌の進展に関与する事が知られている。特に胆管癌においてはEZH2がp16INK4a、p17KIP1の発現を抑制することで癌細胞の増殖を促進することが報告されている。今回、EZH2阻害剤である3-deazaneplanocin A (DZNep)を用いた薬物的EZH2阻害の効果と、胆管癌治療のキードラッグであるgemcitabineとの併用効果を検証することを目的とした。
【方法】 胆管癌細胞株であるRBE及びTFK-1を用いて、DZNep単独投与及びgemcitabineとDZNep併用における1. EZH2発現抑制効果及びH3K27のトリメチル化の変化、2. 細胞増殖に与える影響、3. 細胞周期及びアポトーシスに与える影響、4. p16INK4a、p17KIP1の発現変化を検討した。
【結果】 胆管癌細胞株において、DZNep単独投与ではDMSO投与群と比して、gemcitabine/DZNep併用ではgemcitabine単独と比して、1. EZH2の発現が低下し、3mH3K27発現の低下も認めた。2.growth assayにて有意な増殖能の低下を認めた。3. Flow cytometer を用いた細胞周期解析の結果、G0/G1分画の増加及びG2/S分画の減少を認め、G1-arrestを認めた。また、Pi/Annexin V二重染色を用いたアポトーシス解析の結果、アポトーシス細胞の増加を認めた。4. 蛋白レベルでのp16INK4a、p17KIP1の発現上昇を認めた。
【結論】DZNep投与によりEZH2発現抑制を介した細胞増殖抑制効果を認め、さらにgemcitabineと併用することにより、相乗効果を示すことが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] EZH2 Is Associated with Malignant Behavior in Pancreatic IPMN via p27Kip1 Downregulation (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroki H, Hayashi H, Okabe H, Hashimoto D, Takamori H, Nakahara O, Nakagawa S, Fukushima Y, Chikamoto A, Beppu T, Hirota M, Iyama K, Baba H
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 9(8) ページ: e100904
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0100904
  • 査読あり
• [雑誌論文] Triple positive tumor markers predict recurrence and survival in early stage hepatocellular carcinoma (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa S, Beppu T, Okabe H, Sakamoto K, Kuroki H, Mima K, Nitta H, Imai K, Hayashi H, Sakamoto Y, Hashimoto D, Chikamoto A, Ishiko T, Watanabe M, Baba H
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 44(9) ページ: 964-74
  • DOI: 10.1111/hepr.12277
  • 査読あり
• [学会発表] Vasohibine-1 negative and EZH2 positive may predict the prognosis of cholangiocarcinoma (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa S
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2014
  • 発表場所: San Diego, California
  • 年月日: 2014-04-05 – 2014-04-09
• [学会発表] LSKL peptide inhibits thrombospondin-1-mediated TGF-β signal activation and accelerates liver regeneration after hepatectomy in mice (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroki H
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2014
  • 発表場所: San Diego, California
  • 年月日: 2014-04-05 – 2014-04-09