| 研究実績の概要 |
我々はH24年度，正常および損傷脊髄における脂質の変化を, MALDI法を用いた質量分析顕微鏡法(Imaging Mass Spectrometry)で解析した. まず, 正常脊髄におけるリン脂質, フォスファチジルコリン(PC)の分布を可視化した. そして，ドコサヘキサエン酸(DHA)含有PCは, 脊髄損傷後1日より脊髄損傷の中心部より減少し，その後不可逆的に減少することを明らかにした. H25年度は，炎症を抑制する薬剤であるIL-6受容体抗体（MR16-1抗体）を脊髄損傷後マウスに投与し, 質量分析顕微鏡法を用いる事で，損傷後１週の損傷脊髄においてDHA含有リン脂質であるPC(diacyl(d)-16:0/22:6),PC(d-18:0/22:6)が、損傷周辺部でコントロール群よりも有意に増加したことを明らかにした. この脊髄の質量分析顕微鏡研究は新しい手法であり脊髄損傷のみならず，脊髄変性疾患の脊髄での脂質の経時的変化に応用可能であり，H26年度はヒトG93A変異SOD1トランスジェニックマウス(筋萎縮性側索硬化症モデルマウス)を用いて脊髄のリン脂質, PC分布の経時的変化を調査した. 解析には質量分析顕微鏡法に加え，免疫組織学染色の組織評価を同時に行った. 質量分析顕微鏡解析では, 末期ALS脊髄前角においてDHA含有PCであるPC(d-16:0/22:6), PC(d-18:0/22:6), PC(d-18:1/22:6)がALS発症末期で定性的に減少することを明らかにした. 次にこの減少がどの時期から生じるか明らかにするために, 5(発症前), 10（発症後早期）, 22週（発症後末期）齢のマウスにおいてPC(d-16:0/22:6)の発現を調査した. その結果 PC(d-16:0/22:6)の減少は発症後末期でのみ明らかであった. また, 免疫染色の結果, このPC(d-16:0/22:6)の減少と運動神経に特異的に発現するタンパクであるHb9の発現の減少は同様のパターンを示しており, DHA含有PCであるPC(d-16:0/22:6)の減少はALS脊髄前角における神経細胞減少と関連していると考えられた.
|
