1.実験の対象:オスLEWISラットをレシピエントとしMHCの異なるラットをドナーとして用い、実験を行った。2.間葉系幹細胞の分離、培養、準備:昨年同様に間葉系幹細胞を分離培養した。3.移植手術:Doiらの方法に従って、ラット下肢移植手術を行った(Plast Reconstr Surg 1979)。 4.免疫抑制療法及び実験群:術直後から毎日タクロリムス(FK506)0.2mg/kgを筋肉内注射し、術後6日目まで計7回投与した。分離培養したレシピエント骨髄間葉系幹細胞10x106個を術後7日目にペニス背側の静脈から静脈内投与した。コントロール群として、タクロリムスのみの投与群と全く免疫抑制剤を投与しないno treatment群とisograft群を作成した。5.拒絶反応評価:移植した下肢を24時間ごとに観察し、生存期間を記録した。また、組織を作成し、拒絶反応の程度を組織的に、分子生物学的に評価した。 6.結果:生存期間はisograft群が50日以上、no treatment群が平均約10日間、タクロリムスのみの投与群が平均約18日間、レシピエント骨髄間葉系幹細胞も投与した群が平均約24日間で、統計学的には有意差が認められた。組織学的には、有意に単核球の浸潤が抑制されていた。分子生物学的には、優位にサイトカインの出現が抑制されていた。Mixed lymphocyte reactionでは、レシピエントT細胞の抗原に対する反応が、間葉系幹細胞投与により有意に抑制されていた。レシピエント間葉系幹細胞の投与により拒絶反応をある程度抑制できることが確認された。 途中経過を2014年3月にAmerican Academy of Orthopaedic Surgeonsに公表したため、26年度の研究実績を結果の中に追加し海外雑誌に投稿準備中であある。
|