| 研究概要 |
【目的】Sirt6-/-マウスは、骨量低下、皮下脂肪の菲薄化など、加齢変化と類似した表現型を呈するが、Sirt6の骨軟骨代謝における役割は不明である。本研究の目的は、Sirt6を介する骨軟骨代謝のメカニズムを解明することである。
【方法】Sirt6-/-マウスと野生型マウスを免疫組織学的に評価した。生後1週の長管骨骨端部から採取された初代軟骨細胞、および軟骨細胞様細胞株ATDC5を用いてSirt6の機能評価を行った。
【結果】Sirt6-/-マウスは、四肢長管骨が野生型よりも短縮していた。端部においては、二次骨化中心の成熟が遅延した。生後2週の脛骨成長板軟骨ではSirt6-/-マウスにおいて増殖層と肥大軟骨層が短縮し、増殖マーカーPCNA陽性細胞が著明に減少していた。また一次骨梁の形成は著明に減少していた。TUNEL法ではアポトーシス陽性細胞数に明らかな差は認められなかった。免疫染色では成長板軟骨におけるCol2a1, Col10a1およびIhhの発現がSirt6-/-マウスにおいて低下していた。ATDC5および初代軟骨細胞にてsiRNAによりSirt6をノックダウン（Sirt6KD）すると、CyclinD1とCyclinD2、およびCol2a1, Col10a1, Ihhとその下流遺伝子Gli1, Patchedの発現が低下した。Sirtuin活性を促進するNMNによってCol10a1, Ihhの発現は増加したが、Sirt6KDによってこの効果はブロックされた。またSirt6KDによるCol10a1の発現低下はSmoアゴニストpurmorophamineによって完全にレスキューされた。転写因子ATF4はIhh転写を正に制御するが、初代軟骨細胞を用いたChIP assayの結果、Ihhプロモーターに対するATF4結合はSirt6KDによって抑制された。
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