ＲＮＡｉを用いたアクアポリン機能調節による脳浮腫抑制のｉｎ ｖｉｖｏへの応用

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24592310
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 藤田 義人 愛知医科大学, 医学部, 教授 (90238593)
• 研究分担者: 浅井 清文 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70212462) [辞退] ; 祖父江 和哉 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90264738) [辞退]
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: アクアポリン / 脳浮腫 / ノックダウン

研究実績の概要

アクアポリン（AQP）Knockdown の確立およびoverexpressionの観察、低酸素負荷状態での形態変化の観察を行った。
神経系の細胞のRNAiはinvitrogen社製のBock-it Inducible H1 Lentiviral RNAi systemを利用し、Knockdownが確認されている2-3のconstructを作成したうえ、entry vectorであるpENTER/H1/TO Entry Constractに導入した。目的遺伝子をもつpENTER/H1/TO Entry Constract とpLenti4/BLOCK-IT/DESTをかけあわせることにより目的のshRNAを発現する遺伝子をもったpLenti4/BLOCK-IT/Expression Construct vectorを作成した。そのプラスミドを大腸菌にtransformationして、大量培養し、Quiagen社のキットを用いて、目的となるshRNAを発現する遺伝子をもったconstructを含むプラスミドを大量に、無菌的に精製した。293FTセルラインでレンチウイルスを発現させるため、作成したpLenti4/BLOCK-IT/Expression Constructに加え、レンチウイルスの作成能力を高めるpLP1、pLP2、pLP/VSVG、pENTER-gusのプラスミドをcotransfectさせた。以上により目的となるAQP　Knockdown のshRNAiを発現するレンチウイルスの作成を完了した。アストロサイトのAQP4発現量を、RT-PCRで確認した。以前のKnockdownの発現率に比較して、強くKnockdownしていることが確認できた。
AQPcDNAを遺伝子導入することで、Knockdownのphenotypeがwild-type程度の発現量に戻せることを確認するための、AQP4のcDNAを作成した。Wild-typeのアストロサイトに導入し、overexpressionできることを確認した。今後、rescueできるかを検討中である。
低酸素負荷によりAQP knockdownと、overexpression　細胞株のphenotypeの形態学変化、培養液の変化を観察した。詳細を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Estimation of the success rate of anesthetic management for thymectomy in patients with myasthenia gravis treated without muscle relaxants: A retrospective observational cohort study (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Satoru Moriyama, Satoshi Aoki, Saya Yoshizawa, Maiko Tomita, Taiki Kojima, Yukiko Mori, Naoko Takeuchi, Min-Hye So, Motoki Yano, Kazuya Sobue.
  • 雑誌名: Jounal of Anesthesia 巻: 29 ページ: 1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Leak in PerseusTM workstation after complete check sequences (2015)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Kinosshita, Noboru Hatakeyama, Yoshihito Fujita, Yoshihiro Fujiwara
  • 雑誌名: Journal of Clinical Anesthesia 巻: 27 ページ: 1
  • 査読あり
• [雑誌論文] 大学病院ICUにおける最近5年間の小児veno-arterial extracorporeal membrane oxygenationの稼働実績と今後の課題 (2015)
  • 著者名/発表者名: 仙頭佳起、竹内直子、太田晴子、佐野文昭、上村友二、藤田義人、祖父江和哉
  • 雑誌名: 日本集中治療医学会雑誌 巻: 22 ページ: 1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical usefulness of blood lactate level as a prognostic indicator comparing with Acute Physiology and Chronic Health Evaluation (APACHE) II scores: A retrospective, observational, cohort study (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Tae Kato, Hiroki Yamauchi, Eisuke Kako, Min-Hye So, Tetsuya Tamura, Kazuya Sobue
  • 雑誌名: Nagoya Medical Journal 巻: 59 ページ: 1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Markedly elevated procalcitonin in early postoperative period in pediatric open heart surgery: a prospective cohort study (2014)
  • 著者名/発表者名: Minami E, Ito S, Sugiura T, Fujita Y, Sasano H, Sobue K.
  • 雑誌名: Journal of Intensive Care 巻: 2 ページ: 38
  • DOI: 10.1186/2052-0492-2-38
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Tidal volume and airway pressure under percutaneous transtracheal ventilation without a jet ventilator: comparison of high-flow oxygen ventilation and manual ventilation in complete and incomplete upper airway obstruction models (2014)
  • 著者名/発表者名: N Sasano, A Tanaka, A Muramatsu, Y Fujita, S Ito, H Sasano, K Sobue
  • 雑誌名: Journal of Anesthesia 巻: 28 ページ: 341-6
  • DOI: 10.1007/s00540-013-1733-2
  • 査読あり
• [学会発表] チェックリストを用いたブリーフィングの導入と、インシデント、アクシデントに与える影響 (2015)
  • 著者名/発表者名: 藤田義人、宮本 泰周、田中 美緒、中村 絵美、住江 百合、椋田 崇、森 由紀子、兒玉 絵里、安田 吉孝、安藤 一雄、吉野 博子、赤堀 貴彦、橋本 篤、黒川 修二、神立 延久、佐藤 祐子、下村 毅、畠山 登、木下 浩之、藤原 祥裕
  • 学会等名: 第23回日本集中治療医学会東海北陸地方会 総会・学術集会
  • 発表場所: 福井
  • 年月日: 2015-06-20 – 2015-06-20
• [学会発表] Discrepancy of correlation for dosage of long-term administration of dexmedetomidine and plasma concentrations between adults and infants (< 10 kg) in critically ill patients (2015)
  • 著者名/発表者名: Fujita Y., Inoue K., Yoshizawa S., Sakamoto T., Toyo'oka T., Sobue K
  • 学会等名: Annual Meeting of the European Anesthesiology
  • 発表場所: Berlin
  • 年月日: 2015-05-30 – 2015-06-02
• [学会発表] 小児ICUでの瞳孔記録計(NPi-100)の有効性調査 (2015)
  • 著者名/発表者名: 上村友二、播磨恵、仙頭佳起、宮津光範、太田晴子、徐民恵、森島徹朗、平手博之、藤田義人、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本集中治療医学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-02-09 – 2015-02-11
• [学会発表] 当院ICUにおける誤薬防止のための多角的な対策 ～セーフラベルシステムの導入と多種職への教育の効果～ (2015)
  • 著者名/発表者名: 志田恭子、徐民恵、森島徹朗、平手博之、草間宣好、杉浦健之、藤田義人、田村哲也、岡野将典、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本集中治療医学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-02-09 – 2015-02-11
• [学会発表] 名古屋市立大学病院におけるRapid Response System運用の工夫と課題 (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐野文昭、藤田義人、草間宣好、杉浦健之、岡野将典、辻達也、小笠原治、大内田絵美、伊藤秀和、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本集中治療医学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-02-09 – 2015-02-11
• [学会発表] 本学クリニカルクラークシップにおける麻酔科プログラムの自己分析と課題 (2014)
  • 著者名/発表者名: 祖父江和哉、徐民恵、宮津光範、太田晴子、平手博之、杉浦健之、藤田義人
  • 学会等名: 日本臨床麻酔学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-03
• [学会発表] 殿皮神経障害が原因と考えられた腰痛の1症例 (2014)
  • 著者名/発表者名: 草間宣好、藤田義人、浅井明倫、冨田麻衣子、播磨恵、竹内直子、幸村英文、平手博之、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本ペインクリニック学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-07-24 – 2014-07-26
• [学会発表] A型ボツリヌス毒素容量調節に難渋し中和抗体価測定を行った眼瞼痙攣の1例 (2014)
  • 著者名/発表者名: 太田晴子、杉浦健之、大堀久、幸村英文、平手博之、草間宣好、藤田義人、冨田麻衣子、吉澤佐也、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本ペインクリニック学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-07-24 – 2014-07-26
• [学会発表] 当院ICUにおける誤薬・誤投予防止の取り組み－セーフラベルシステムの導入－ (2014)
  • 著者名/発表者名: 志田恭子、前田純依、宮津光範、竹内直子、幸村英文、平手博之、草間宣好、杉浦健之、有馬一、藤田義人、祖父江和哉
  • 学会等名: 第22回日本集中治療医学会東海北陸地方会 総会・学術集会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2014-06-14 – 2014-06-14
• [学会発表] 帝王切開手術時の母体へ糖質輸液が母体・新生児血糖値に及ぼす影響 (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉澤佐也、藤田義人、冨田麻衣子、藤掛数馬、播磨恵、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本麻酔科学会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-05-15 – 2014-05-17
• [学会発表] エリスロポエチン投与によるミクログリアを介した脳保護効果 (2014)
  • 著者名/発表者名: 田村哲也、青山峰芳、藤田義人、仲野実輝、浅井清文、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本麻酔科学会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-05-15 – 2014-05-17
• [学会発表] 重度低ナトリウム血症を来した帯状疱疹の1症例 (2014)
  • 著者名/発表者名: 浅井明倫、杉浦健之、冨田麻衣子、吉澤佐也、太田晴子、徐民恵、草間宣好、平手博之、藤田義人、祖父江和哉
  • 学会等名: 東海・北陸ペインクリニック学会第25回東海地方会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2014-05-10 – 2014-05-10
• [学会発表] エリスロポエチンによる脳保護効果とミクログリアの活性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 田村哲也、太田晴子、藤田義人、祖父江和哉
  • 学会等名: 日本神経麻酔・集中治療研究会
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2014-04-18 – 2014-04-19