婦人科癌転移の特異的糖鎖構造解析と認識糖鎖抗原をターゲットする新規治療抗体の開発

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24592530
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 鈴木 淳 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (00255514)
• 研究分担者: 鈴木 雅美 慶應義塾大学, 医学部, 共同研究員 (10276321) ; 冨永 英一郎 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80276328)
• キーワード: 糖鎖抗原 / 抗体療法

研究概要

本研究の目的は婦人科癌のリンパ節転移に対する新たな治療抗体の開発である。癌化に伴う細胞の糖鎖異常は以前から注目され、今回の研究ではまずは癌細胞の転移能上昇における特異的な糖鎖構造の解明を行い、婦人科癌の転移で変化する特異的な糖鎖構造を解明する。病態の診断上に同定した特異的糖鎖構造の変化は重要であり、上昇する糖鎖構造は糖鎖バイオマーカーとしての役割も補い、今後はレクチンマイクロアレイにて糖鎖バイオマーカーの変化を検出する個別化診断にも将来的には臨床現場に役立つことが期待される。治療面においてもリンパ節転移を有する症例は有意に予後不良であり、様々な治療法に対して難治性であり、特にリンパ節転移巣は従来の抗癌剤治療の効果には限界がある。従って、リンパ節転移をターゲットした新たな治療薬の開発が期待される。現在までに婦人科癌の手術検体のレクチンマイクロアレイを用いて、表面糖鎖抗原の比較解析を行い、転移能と関連性が高い糖鎖抗原のプロファイルを作成している。今後はこれらの糖鎖抗原をターゲットする治療抗体の作成を目的として研究が進行中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

現在までにレクチンマイクロアレイを用いて、婦人科癌の転移能と関連性が高い細胞表面の糖鎖抗原のプロファイルを作成した。今後はこの糖鎖抗原を治療ターゲットとした抗体作成を進める。

今後の研究の推進方策

今後の研究実施計画として以下を行う。
転移関連糖鎖構造を有する腫瘍細胞の特定：Glycoblotting法にて治療ターゲットの糖鎖抗原を選別する。Glycoblottingで表面糖鎖の補足して、質量分析にて糖鎖構造を確認する。Sweetblot方を用いて、糖鎖構造を有する腫瘍細胞を選別する。この方法は細胞表面糖鎖をケモセレクションにて捕捉を可能とし、特定な糖鎖構造のみを選別し、その構造を発現する腫瘍細胞を生体試料としての利用を可能とする。上記にて転移関連糖鎖抗原を発現する腫瘍細胞を精製する。
新規ヒトモノクローナル抗体の作製：上記方法にて精製した腫瘍細胞を免疫原として完全ヒト型抗体を産生するKM mouseに投与し、従来の方法にてヒトモノクローナル抗体を作製する。癌細胞のみを高い確率で認識するヒト型モノクローナル抗体を作製してきた。すなわち、KM mouse脾細胞とミエローマ細胞SP2/O-Ag14をPEG1500を用いて細胞融合を行う。得られたハイブリドーマの培養上清を用いた免疫組織化学的染色を繰り返し、限界希釈法により特異的に反応するハイブリドーマを選別する。ハイブリドーマのスクリーニングには臨床検体の転移巣および原発腫瘍の違いを利用してcell ELISAおよび免疫組織化学的に選別する。
モノクローナル抗体の抗腫瘍効果の検討:　作製したヒトモノクローナル抗体の機能評価にはリンパ節転移モデルを利用してin vivoで検討し、有望な転移関連糖鎖抗原をターゲットする新たなヒトモノクローナル抗体を選別する。

研究成果

• [雑誌論文] Glycan profiling of gestational choriocarcinoma using a lectin microarray (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Y, Masuda K, Banno K, Kobayashi N, Umene K, Nogami Y, Tsuji K, Ueki A, Nomura H, Sato K, Tominaga E, Shimizu T, Saya H, Aoki D.
  • 雑誌名: Oncol Rep 巻: 31(3) ページ: 1121-6
  • DOI: 10.3892/or.2014.2979
  • 査読あり
• [雑誌論文] HMMC-1, a human monoclonal antibody to fucosylated core 1 O-glycan, suppresses growth of uterine endometrial cancer cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Oikawa F, Kojima-Aikawa K, Inoue F, Suzuki A, Tanaka K, Tominaga E, Aoki D.
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 104(1) ページ: 62-9
  • DOI: 10.1111/cas.12038
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo regulation of steroid hormones by the Chst10 sulfotransferase in mouse. (2013)
  • 著者名/発表者名: Suzuki-Anekoji M, Suzuki A, Wu SW, Angata K, Murai KK, Sugihara K, Akama TO, Khoo KH, Nakayama J, Fukuda MN, Fukuda M.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 288(7) ページ: 5007-16
  • DOI: 10.1074/jbc.M112.433474
  • 査読あり
• [雑誌論文] Gene expression profile of a newly established choriocarcinoma cell line, iC3-1, compared to existing choriocarcinoma cell lines and normal placenta (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Y, Banno K, Shimizu T, Ueki A, Tsuji K, Masuda K, Kisu I, Nomura H, Tominaga E, Nagano O, Saya H, Aoki D
  • 雑誌名: Placenta 巻: 34(2) ページ: 110-8
  • DOI: 10.1016/j.placenta.2012.11.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] The origin of stroma surrounding epithelial ovarian cancer cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Akahane T, Hirasawa A, Tsuda H, Kataoka F, Nishimura S, Tanaka H, Tominaga E, Nomura H, Chiyoda T, Iguchi Y, Yamagami W, Susumu N, Aoki D
  • 雑誌名: Int J Gynecol Pathol 巻: 32(1) ページ: 26-30
  • DOI: 10.1097/PGP.0b013e3182518533
  • 査読あり
• [学会発表] Multiplexed quantification of biomarker candidates by mass spectrometry for early-detection of ovarian cancer (2013)
  • 著者名/発表者名: A Toyama, A Suzuki, T Shimada, Y Aoki, D Aoki, T Sato
  • 学会等名: 日本癌学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] Review of cases of ovarian borderline tumors with tumor-derived atypical cells in peritoneal cytology (2013)
  • 著者名/発表者名: Iguchi Y, Kataoka F, Nomumra H, Tsuda H, Chiyoda T, Hashimoto S, Takigawa A, Kuwahata M, Yamagami W, Tominaga E, Susumu N, Aoki D
  • 学会等名: International Congress of Cytology
  • 発表場所: Palais de Congress, Paris, France
  • 年月日: 20130526-20130530
• [学会発表] The diagnostic significance of hysteroscopy in the preoperative diagnosis of endometrial cancer compared with cytologic and histologic examination. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takigawa A, Susumu N, Kuwahata M, Hashimoto S, Iguchi Y, Chiyoda T, Yamagami W, Nomura H, Kataoka F, Tominaga E, Suzuki A, Banno K, Aoki D
  • 学会等名: International Congress of Cytology
  • 発表場所: Palais de Congress, Paris, France
  • 年月日: 20130526-20130530