卵巣明細胞腺癌に対するｍＴＯＲ阻害剤によるＥＭＴ現象の制御とその応用

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24592536
• 研究機関: 大阪医科大学
• 研究代表者: 恒遠 啓示 大阪医科大学, 医学部, 助教 (70388255)
• 研究分担者: 田中 良道 大阪医科大学, 医学部, 助教 (10625502) ; 林 正美 大阪医科大学, 医学部, 助教 (00551748) ; 金村 昌徳 大阪医科大学, 医学部, 講師 (40298782) ; 田辺 晃子 大阪医科大学, 医学部, 講師 (70454543) ; 寺井 義人 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (90278531) ; 山田 隆司 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10182536) ; 朝日 通雄 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10397614) ; 大道 正英 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10283764)
• キーワード: CD24 / MET / Met

研究概要

類内膜細胞株であるECC、Hec-1A、Hec-108を用いた。表現マーカーCD24によりフローサイトメトリーで、CD24陽性細胞とCD24陰性細胞とに分離した。シスプラチンを添加し、CD24陽性細胞cell viabilityをMTS assayで確認した。結果はCD24陽性細胞はCD24陰性細胞に比しcell viabilityは抑制が認められた。またAktの活性化を、Western blotting法で検討をした。結果はCD24陽性細胞がAktの活性化がみられた。アポトーシスが起こっているかをPRAPの発現をWestern blotting法で確認し、CD24陽性細胞はCD24陰性細胞に比しアポトーシスが少ないことがわかった。
次にMET-HGFR(hepatocyte growth factor)signalの検討をした。類内膜細胞株であるECC、Hec-1A、Hec-108を用いCD24陽性細胞とCD24陰性細胞とに分離、Met、Akt、ERK、MDR、MRPの活性をcontrol、Foretinib（Met inhivitor)、MAP inhibitor、AKT inhibiorを添加しWestern blotting法で比較し確認した。結果はCD24陽性細胞はCD24陰性細胞に比しMetが多く発現しており、ABC transporterであるMDRやMRPが多く発現していることが確認された。CD24陽性が耐性を持つ原因がMDRやMRPの発現の量にある可能性が示唆される。
efflux assayにて毒素の排出を確認したところCD24陽性細胞が多く排出をしていることも確認された。
同様にして卵巣癌株においてもCD24を介したEMT現象が認められ、治療標的となり得ることを確認している

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

卵巣癌においてもCD24発現は、EMTを引き起こし、抗癌剤耐性であることが証明され、次は既存のmTOR阻害剤による影響を確かめる段階にすすんでいるため、おおむね順調に進展していると判断した。

今後の研究の推進方策

25年度の実験をふまえ、明細胞卵巣癌細胞株RMG-1を用い、mTOR阻害剤によるEMT化抑制を、マウスを用いたin vivoで証明していく予定である。

研究成果

• [学会発表] 上皮間葉転換(EMT)を介した浸潤・転移の制御を目指して ～CD24の機能解析～ (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村起代子、田中良道、川口浩史、高井雅聡、兪史夏、藤原聡枝、田中智人、恒遠啓示、田辺晃子、金村昌徳、寺井義人、大道正英
  • 学会等名: 第53回日本婦人科腫瘍学会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20130510-20130512
• [学会発表] 卵巣癌におけるEMT現象の意義 (2013)
  • 著者名/発表者名: 高井雅聡、寺井義人、川口浩史、中村路彦、兪史夏、藤原聡枝、田中智人、田中良道、恒遠啓示、田辺晃子、金村昌徳、大道正英
  • 学会等名: 第53回日本婦人科腫瘍学会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20130510-20130512
• [学会発表] 白金製剤耐性卵巣癌におけるAktをターゲットとした分子標的薬としてのGemicitabineの機能解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 川口浩史、寺井義人、恒遠啓示、佐々木浩、高井雅聡、兪史夏、藤原聡枝、田中智人、田中良道、田辺晃子、金村昌徳、大道正英
  • 学会等名: 第53回日本婦人科腫瘍学会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20130510-20130512