| 研究課題/領域番号 |
24592594
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
峯田 周幸 浜松医科大学, 医学部, 教授 (40190714)
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| 研究分担者 |
三澤 清 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (90334979)
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| キーワード | 網羅的メチル化解析 / 頭頸部癌 / 中咽頭癌 / ＨＰＶ / 次世代シークエンサー |
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| 研究概要 |
頭頸部癌におけるゲノム網羅的なエピジェネティック解析という研究テーマで、研究を遂行している。近年、DNAのメチル化を始めとするエピジェネティックな変化が、RNA合成、ひいてはタンパク質の発現を抑制することから、癌化機構の一つとして認識されている
。最近、ゲノム全体のメチル化状態を明らかにするメチル化DNA解析は、次世代シークエンサーの登場で網羅性と解像度に大きな向上がみられている。特にゲノム網羅的エピゲノム解析法の登場で、いままで困難であった網羅性を実現することができるようになってい
る。
本年度は、ゲノム網羅的エピゲノム解析のためのサンプルの作成を行い臨床検体の収集を行った。ＨＰＶ関連中咽頭癌6例、ＨＰＶ非関連中咽頭癌6例、非癌部口蓋扁桃4例の取集を行いＤＮＡ抽出を行っている。来年度は、これらのサンプルを使って実際に次世代シークエンシングを広島大学にておこなう予定である。データー解析も広島大学で行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、ゲノム網羅的エピゲノム解析のためのサンプルの作成に成功した。喉頭癌細胞株（Hep-2）を5-Azacytidine（脱メチル化剤を）による治療を行った。5-Azacytidineを5uMの濃度で7日間治療を行うのがHep-2細胞株に対しては効率的に脱メチル化を起こすことを確認している。7日間の治療を5回ほど行いそれぞれの治療でmRNA、 DNAをおのおの抽出してeEF1A2, GALR1, SALL3遺伝子のmRNAの再発現とDNA脱メチル化をPCR法にて確認している。先に述べたように、臨床検体の収集が2年間で終了した。
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| 今後の研究の推進方策 |
初年度の実験計画はおおむね予定通りに進んでいる。来年度は、実際に広島大学にてシークエンシングを行う予定である。細胞株からのデーターを確認・解析をしながら臨床検体のシークエンスを行う予定である。癌幹細胞関連マーカーの発現との比較などおこなう。予算の限り多検体を解析しデーターの蓄積を行っていきたい。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
昨年度は、次世代シークシークエンサーの解析費用が余ったため予算使用額が少なかったと考える。本年度は、サンプルすべての解析を行うため予算は使い切る予定である。
次世代シークエンサーの解析を広島大学にて行う予定である
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