ＥＢウイルス由来小ＲＮＡ ＥＢＥＲを介した自己免疫応答誘導の可能性の検討

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24592783
• 研究機関: 日本薬科大学
• 研究代表者: 井上 裕子 日本薬科大学, 薬学部, 准教授 (50367306)
• 研究分担者: 斎藤 一郎 鶴見大学, 歯学部, 教授 (60147634) ; 村松 敬 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (00276982) ; 梁 洪淵 鶴見大学, 歯学部, 講師 (10298268)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: シェーグレン症候群 / EBウイルス / EBER / SSB/La

研究実績の概要

EBウイルス由来の小RNAであるEBER、あるいはEBウイルス由来DNAによる自然免疫系の活性化の可能性をin vitroで確認するために、ヒト唾液腺上皮細胞株のHSYおよびHSGについて、TLR3およびTLR9のプラスミドを遺伝子導入したTLR3,TLR9を恒常的に発現する細胞株を樹立を試みた。HSY、およびHSG細胞に発現プラスミドに組み込んだTLR3、およびTLR9をネオマイシン耐性遺伝子の入ったプラスミドを同時に遺伝子導入し、G418を800μg/mLの濃度で添加した培養液で培養し、薬剤耐性細胞株を得た。薬剤耐性細胞株について、RT-PCR法およびウェスタンブロッティング法によりTLR3、TLR9を発現している細胞株を確認した。これらの細胞株を用いて、それぞれのレセプターのリガンドであるCpG、あるいはpoly(I:C)で刺激後、炎症性サイトカイン（IL-1,IL-6、TNF-α、IFN-γ）やBAFFなどの遺伝子発現について検討を行った。その結果、TLR9発現細胞において、CpG刺激をした際にBAFF、IL-1β、IL-6、TNF-αについて、増加する傾向が認められた。また、TLR3発現細胞にpoly(IC)を作用させた際には、TNF-αは増加傾向にあったが、他のサイトカインに関しては明らかな変化は認められなかった。また、生体内でのEBERの作用を検討するために、EBウイルス感染B細胞株のAkata細胞を抗IgG抗体を用いて、細胞膜上のIgGを架橋することでEBウイルスの再活性化を誘導し、この細胞の核抽出液を得て、BALB/cマウスへ投与した。その結果、Akata核抽出液投与群では自己抗体の発現増強が認められたが、唾液量の明らかな変化は認められなかった。さらに、in vitroで合成したEBERをNZW/Bマウスへ投与したところ、同様に自己抗体の産生が認められた。

研究成果

• [雑誌論文] Evaluation of the effects of quercetin on damaged salivary secretion (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A. Inoue, H. Mishima, K. Ide, F. Nakayama, R. Hasaka, A. Ryo, K. Ito, Y. Sakurai, T. Hasegawa, Y. Saito, I.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0116008
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0116008
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Role of the histone H3 lysine 9 methyltransferase Suv39 h1 in maintaining Epsteinn-Barr virus latency in B95-8 cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Imai, K. Kamio, N. Cueno, M. E. Saito, Y. Inoue, H. Saito, I. Ochiai, K.
  • 雑誌名: FEBS J 巻: 281 ページ: 2148-58
  • DOI: 10.1111/febs.12768
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Therapeutic effects of isoflavones on impaired salivary secretion (2014)
  • 著者名/発表者名: Ryo, K. Takahashi, A. Tamaki, Y. Ohnishi-Kameyama, M. Inoue, H. Saito, I.
  • 雑誌名: J Clin Biochem Nutr 巻: 55 ページ: 168-73
  • DOI: 10.3164/jcbn.14-49
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Primary and secondary surveys on epidemiology of Sjogren's syndrome in Japan (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsuboi, H. Asashima, H. Takai, C. Hagiwara, S. Hagiya, C. Yokosawa, M. Hirota, T. Umehara, H. Kawakami, A. Nakamura, H. Sano, H. Tsubota, K. Ogawa, Y. Takamura, E. Saito, I. Inoue, H. Nakamura, S. Moriyama, M. Takeuchi, T. Tanaka, Y. Hirata, S. Mimori, T. Yoshifuji, H. Ohta, A. Matsumoto, I. Sumida, T.
  • 雑誌名: Mod Rheumatol 巻: 24 ページ: 464-70
  • DOI: 10.3109/14397595.2013.843765
  • 査読あり
• [学会発表] EBVの再活性化とシェーグレン症候群 (2014)
  • 著者名/発表者名: 井上裕子
  • 学会等名: 第23回日本シェーグレン症候群学会学術集会
  • 発表場所: ホテルニュー長崎
  • 年月日: 2014-09-12 – 2014-09-13
• [学会発表] 唾液分泌障害に対するケルセチンの効果の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 高橋絢子、中山亮子、葉阪彩加、伊藤由美、梁 洪淵、櫻井 孝、栗原 毅、井出文雄、美島健二、井上裕子、斎藤一郎
  • 学会等名: 第14回抗加齢医学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-06-06 – 2014-06-08
• [学会発表] 分泌機能促進因子の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 井上裕子
  • 学会等名: 第14回抗加齢医学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2014-06-06 – 2014-06-08
• [学会発表] 液分泌障害に対するケルセチンの効果の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 高橋絢子、井上裕子、美島健二、伊藤由美、梁 洪淵、櫻井 孝、井出文雄、斎藤一郎
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島国際会議場
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26