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p63(TP63)はp53(TP53)癌抑制遺伝子ファミリーの1つで、口喉咽頭由来の扁平上皮癌、尿路上皮癌の高分化型の癌細胞で高レベル発現する。p63の発現消失が癌の悪性転化を誘導する機構を明らかにするため、本研究を行った。
１．扁平上皮癌細胞でp63をノックダウンし、遺伝子発現プロファイル解析を行った。p63標的遺伝子、p53標的遺伝子、分化関連遺伝子に加えて、Wnt/β-カテニン標的遺伝子に再現性のある変化が認められた。しかし、一部のWnt/β-カテニン標的遺伝子(MMP7、AXIN2等)ではp63による発現抑制が、他方(CCND2、SNAI2等)では発現促進が示唆され、RT-qPCRでも確認された。
２．標準ベクターとして用いたpGL3-OT-luc はWnt response element (WRE)を3コピー持ちルシフェラーゼ(luc)を発現する。HEK293ではβ-カテニン依存性luc発現がp63の主要アイソフォームΔNp63αによって活性化された。しかし、pGL3-OT-lucにp53ファミリー結合モチーフ(p53FM)の存在を見出し、これを欠失させるとΔNp63αによる活性化が消失した。また、SAOS2細胞ではp53FMの有無に関わらず、β-カテニン応答性のluc発現をΔNp63αが抑制した。
３．MMP7およびCCND2の制御領域に存在するWRE配列について、p63の影響を検討した。どのWREもβ-カテニンで活性化され、ΔNp63αはこれを抑制した。
４．FaDu細胞でp63をノックダウンし、免疫染色と細胞質/核画分によりシグナル伝達系の変化を解析した。p63とβ-カテニンの核移行に関連性はなかった。
以上の結果はp63が核内でWREを抑制することを示し、p63の消失によるWnt/β-カテニン経路の増強が浸潤能を獲得する機構の１つと考えられる。
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