炎症性歯周組織におけるＴｈ１７細胞に対するＩＬ－３５の影響

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24593134
• 研究機関: 愛知学院大学
• 研究代表者: 三谷 章雄 愛知学院大学, 歯学部, 准教授 (50329611)
• 研究分担者: 菊池 毅 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (40421242) ; 相野 誠 愛知学院大学, 歯学部, 助教 (20572811) ; 石原 裕一 愛知学院大学, 歯学部, 准教授 (50261011)
• キーワード: IL-35 / Th17

研究概要

歯周病病態でのTh17関連免疫応答におけるIL-35の役割を明らかにすることを目的として、歯周病患者および健常者サンプルを用いて検討している．
平成25年度は、平成24年度に引き続き、患者および健常者の末梢血を採取し，そこからCD4+T細胞をソーティングし、Th17細胞誘導条件下で培養してきた。その培養上清中のIL-17Aタンパク質産生を調べているが、今後もサンプル数を増やすべく、26年度も継続する必要がある。
また、誘導したTh17細胞に対するリコンビナントIL-35(rIL-35)の影響を調べ、以下のような結果を得ている。
①誘導したTh17細胞にrIL-35を添加すると、48時間後の培養上清中においてIL-17産生量は添加していないコントロールに比べて有意に減少していた。②Th17誘導条件下にrIL-35を添加した場合でも同様にIL-17産生量は添加していないコントロールに比べて有意に減少していた。③上記①および②の条件でRORa, RORC, T-bet, GATA3のmRNA発現を比較したところ、IL-35添加によりRORaの有意な発現抑制を認めた。また、T-betやGATA3にはあまり影響しないという結果を得ている。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

購入したrIL-35の生物活性がほとんど無いという結果が得られたため、生物活性を有するrIL-35商品を検索する必要性が出た。このことに実際かなりの時間を有した。この点は想定外であったが、弱いながらも活性を認めたリコンビナント蛋白製品を見つける事が出来たため、今後も研究を継続する事は可能であると考える。

今後の研究の推進方策

引き続き平成26年度では、①患者末梢血由来Th17細胞におけるIL-17発現量および産生能の解析（MACSによるTh17細胞分離後，IL-17 secretion assayおよびreal-time PCR解析を行う）(継続)、②患者および健常者の末梢血由来CD4+T細胞から誘導できたTh17細胞のIL-17産生能の解析（MACSによるCD4+T細胞分離後，Th17誘導環境下で４日間培養後、Th17細胞として回収．その後，IL-17 secretion assayを行う）(継続)、③患者末梢血由来Th17細胞に対するrIL-35の影響の解析（MACSによるTh17細胞分離後またはTh17細胞誘導時，rIL-35を添加して培養しcytokine FACSおよびIL-17 ELISAを行う）、④歯周病原性細菌によるIL-17産生T細胞ポピュレーションに及ぼすIL-35の役割の検討（MACSによるCD4+T細胞分離後，Th17誘導環境下で４日間培養後、Th17細胞として回収．その後，抗原提示細胞とPorphyromonas gingivalisあるいはAggregatibacter actinomycetemcomitansと共に培養する．rIL-35を添加し，細胞増殖活性やreal-time PCR解析（IL-17、IL-10、IL-5、IFNγ、RORγt、Foxp3、T-bet、GATA3等）、cytokine FACSを行う）、を出来るだけ急いで行い、その結果を解析し、総合的に評価・考察する計画である．

研究成果

• [雑誌論文] Inflammatory bone loss in experimental periodontitis induced by Aggregatibacter actinomycetemcomitans in IL-1Ra knockout mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Izawa A, Ishihara Y, Mizutani H, Kobayashi S, Goto H, Okabe E, Takeda H, Ozawa Y, Kamiya Y, Sugita Y, Kubo K, Kamei H, Kikuchi T, Mitani A, Hayashi J, Nishihara T, Maeda H, Noguchi T.
  • 雑誌名: Infect Immun 巻: 82 ページ: 1904-1913
  • DOI: 10.1128/IAI.01618-13
  • 査読あり
• [雑誌論文] Five-year clinical results for treatment of intrabony defects with EMD, guided tissue regeneration and open-flap debridement: a case series (2014)
  • 著者名/発表者名: Mitani A,Takasu H,Horibe T, Furuta H, Nagasaka T, Aino M, Fukuda M, Fujimura T, Mogi M, Noguchi T.
  • 雑誌名: J Periodont Res 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1111/jre.12188
  • 査読あり
• [雑誌論文] Management of traumatic dental injury after periodontal surgery in patient with hereditary gingival fibromatosis: Case report (2014)
  • 著者名/発表者名: Inagaki K, Kamei H, Mitani A, Noguchi T.
  • 雑誌名: Oral Health Dent Manag 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nitric Oxide-induced regulatory T cells inhibit Th17 but not Th1 cell differentiation and function (2013)
  • 著者名/発表者名: Niedbala W, Besnard AG, Jiang HR, Alves-Filho JC, Fukada SY, Nascimento D, Mitani A, Pushparaj P, Alqahtani MH, Liew FY.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 191 ページ: 164-170
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1202580
  • 査読あり
• [雑誌論文] Antimicrobial photodynamic therapy using a diode laser with a potential new photosensitizer, indocyanine green-loaded nanospheres, may be effective for the clearance of Porphyromonas Gingivalis (2013)
  • 著者名/発表者名: Nagahara A, Mitani A, Fukuda M, Yamamoto H, Tahara K, Morita I, Ting C-C, Watanabe T, Fujimura T, Osawa K, Sato S, Takahashi S, Iwamura Y, Kuroyanagi T, Kawashima Y, Noguchi T.
  • 雑誌名: J Periodont Res 巻: 48 ページ: 591-599
  • DOI: 10.1111/jre.12042
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lipopolysaccharide of Aggregatibacter actinomycetemcomitans up-regulates inflammatory cytokines, prostaglandin E2 synthesis and osteoclast formation in interleukin-1 receptor antagonist-deficient mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Mizutani H, Ishihara Y, Izawa A, Fujihara Y, Kobayashi S, Gotou H, Okabe E, Takeda H, Ozawa Y, Kamiya Y, Kamei H, Kikuchi T, Yamamoto G, Mitani A, Nishihara T, Noguchi T.
  • 雑誌名: J Periodont Res 巻: 48 ページ: 748-756
  • DOI: 10.1111/jre.12065
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aggregatibacter actinomycetemcomitans lipopolysaccharide stimulated epithelial cells produce interleukin-15 that regulates T cell activation (2013)
  • 著者名/発表者名: Suga T, Mitani A, Mogi M, Kikuchi T, Fujimura T, Takeda H, Hishikawa T, Yamamoto G, Hayashi J, Ishihara Y, Noguchi T.
  • 雑誌名: Arch Oral Biol 巻: 58 ページ: 1541-1548
  • DOI: 10.1016/j.archoralbio.2013.06.020
  • 査読あり
• [雑誌論文] Follicular dendritic cell-secreted protein expression is reduced in experimental periodontitis concurrently with the up-regulation of IL-17 mRNA and an increase in the RANKL/OPG mRNA ratio (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi S, Fukuda M, Mitani A, Fujimura T, Iwamura Y, Sato S, Kubo T, Sugita Y, Maeda H, Shinomura T, Noguchi T.
  • 雑誌名: J Periodont Res 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1111/jre.12118
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nd:YAG laser irradiation of the tooth root surface inhibits demineralization and root surface softening caused by minocycline application (2013)
  • 著者名/発表者名: Watanabe T, Fukuda M, Mitani A, Ting CC, Osawa K, Nagahara A, Sato S, Fujimura T, Takahashi S, Iwamura Y, Murakami T, Noguchi T.
  • 雑誌名: Photomed Laser Surg 巻: 31 ページ: 571-577
  • DOI: 10.1089/pho.2013.3561
  • 査読あり
• [雑誌論文] Irradiation with a low-level diode laser induces the developmental endothelial locus-1 gene and reduces pro-inflammatory cytokines in epithelial cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujimura T, Mitani A, Fukuda M, Mogi M, Osawa K, Takahashi S, Aino M, Iwamura Y, Miyajima S, Yamamoto H, Noguchi T.
  • 雑誌名: Lasers Med Sci 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of IL-15 and natural killer cells on osteoclast and osteoblast in a mouse coculture (2013)
  • 著者名/発表者名: Takeda H, Kikuchi T, Soboku K, Okabe I, Mizutani H, Mitani A, Ishihara Y, Noguchi T.
  • 雑誌名: Inflammation 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [学会発表] ポケット外照射を想定したインドシアニングリーン封入ナノ粒子が半導体レーザー照射によるエネルギー吸収・温度変化に与える影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩村侑樹, 福田光男, 三谷章雄, 山本浩充, 西田英作, 佐藤聡太, 高橋伸行, 藤村岳樹, 岡田康佑, 河合達志, 野口俊英.
  • 学会等名: 愛知学院大学歯学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 20131201-20131201
• [学会発表] ICGナノ粒子による軟組織透過エネルギー吸収の基礎的検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 岡田康佑, 福田光男, 三谷章雄, 山本浩充, 西田英作, 佐藤聡太, 高橋伸行, 藤村岳樹, 岩村侑樹, 須賀貴行, 渡辺智久, 佐々公太, 大澤数洋, 永原絢子, 河合達志, 野口俊英.
  • 学会等名: レーザー歯学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20130929-20130929
• [学会発表] 垂直性骨欠損に対し GTR 法とエナメルマトリックスタンパク質を用いた歯周組織再生療法を行った症例の 5 年経過時における臨床的比較 (2013)
  • 著者名/発表者名: 相野誠, 三谷章雄, 高須英成, 古田英豊, 永坂太郎, 三輪晃資, 菊池毅, 川瀬仁史, 伊藤正満, 林潤一郎, 黒須康成,石原裕一, 稲垣幸司, 福田光男, 野口俊英.
  • 学会等名: 日本歯科保存学会春期学術大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20130627-20130627
• [学会発表] 歯科用コーンビームCTにおける歯根膜腔観察を目的とした最適構成フィルタの検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 法野祐規、菱川敏光，後藤賢一、内藤宗孝、中山美和、吉田和史、三谷章雄、野口俊英、有地榮一郎、小寺吉衛.
  • 学会等名: 日本歯科放射線学会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20130601-20130601
• [図書] 慢性疾患としての歯周病のアプローチ 患者さんの生涯にわたるQOLに貢献するために (2014)
  • 著者名/発表者名: 野口俊英、林潤一郎、三谷章雄他
  • 総ページ数: 252
  • 出版者: 医歯薬出版