レンチウイルス抗体ディスプレイライブラリーを用いた癌標的治療法の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24650629
• 研究機関: 鳥取大学
• 研究代表者: 中村 貴史 鳥取大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70432911)
• キーワード: 癌 / 抗体 / バイオテクノロジー / ウイルス / 生体機能利用

研究概要

癌は日本における死亡原因でもっとも多い病気であり、特に現行の治療法に対して抵抗性を示す難治性進行癌に対する新規治療法の確立が望まれている。これまでの研究により、麻疹ウイルスのエンベロープであるH/F蛋白による膜融合能を、H蛋白の元来の細胞レセプターへの吸着能を排除する変異（Haals)を加え、かつ一本鎖抗体（scFv）によって制御することに世界で初めて成功した。さらに、レンチウイルスのエンベロープをこのHaals-scFv/F蛋白で置換することにより、scFvを介して特定の標的細胞にのみ感染するシュードタイプレンチウイルスベクターの作出にも成功した。そこで本研究では、この技術を応用しレンチウイルスにscFvを提示させた革新的ライブラリーを確立し、このライブラリーより網羅的に悪性腫瘍特異的抗体を同定することによって新しい癌標的治療法の開発を目指している。
本年度は、同定済みの腫瘍特異的scFv（CD9、CD20、CD38、CEA、EGFR、EGFRｖIII、HER2、TfRなど）からなるミニライブラリーをHaalsの細胞外C末端に連結させ、そのHaals-scFvsをレンチウイルスベクターに挿入したプラスミドライブラリーを構築した。それを用いて、レンチウイルス抗体ディスプレイライブラリーを作製し、ヒト肺癌、又は膵臓癌細胞への感染によるscFvのスクリーニングを試み、各癌細胞で発現している標的分子に対する腫瘍特異的scFvが同定できるかどうかを検討した。その結果、Haals-scFv/F発現プラスミドを使ったュードタイプレンチウイルスの作出に比べて、Haals-scFvs発現ユニットをウイルスに挿入した抗体ライブラリーの作出では、ウイルスの産出量が激減し、十分なライブラリーサイズに達していないことが判明した。現在、ウイルス産出量を向上させるための改良に取り組んでいる。

研究成果

• [雑誌論文] Antibody neutralization of retargeted measles viruses (2014)
  • 著者名/発表者名: Lech PJ, Pappoe R, Nakamura T, Russell SJ
  • 雑誌名: Virology 巻: 454-455 ページ: 237-246
  • DOI: 10.1016/j.virol.2014.01.027
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combined Cytolytic Effects of a Vaccinia Virus Encoding a Single Chain Trimer of MHC-I with a Tax-Epitope and Tax-Specific CTLs on HTLV-I-Infected Cells in a Rat Model (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohashi T, Nakamura T, Kidokoro M, Zhang X, and Shida H
  • 雑誌名: BioMed Research International 巻: Volume 2014: Article ID 902478
  • DOI: 10.1155/2014/902478
  • 査読あり
• [学会発表] Safety profile, tumor selectivity and oncolytic effects after systemic administration of oncolytic vaccinia virus MDVV
  • 著者名/発表者名: Naoyoshi Nitta, Nao Okada, Ikumi Goto, Masato Yamane, Motomu Nakatake, Hajime Kurosaki, Takafumi Nakamura
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜（パシフィコ横浜）
• [学会発表] SYSTEMIC CANCER VIROTHERAPY WITH MDVV, A COMBINED miRNA-REGULATED AND THYMIDINE KINASE-DELETED ONCOLYTIC VACCINIA VIRUS
  • 著者名/発表者名: Naoyoshi Nitta, Nao Okada, Ikumi Goto, Masato Yamane, Motomu Nakatake, Hajime Kurosaki, Takafumi Nakamura
  • 学会等名: The 19th Annual Meeting of Japan Society of Gene Therapy
  • 発表場所: 岡山（岡山コンベンションセンター）
• [学会発表] Systemic cancer virotherapy with MDVV, a combined miRNA-regulated and thymidine kinase-deleted oncolytic vaccinia virus
  • 著者名/発表者名: Naoyoshi Nitta, Nao Okada, Ikumi Goto, Motomu Nakatake, Masato Yamane, Hajime Kurosaki, Takafumi Nakamura
  • 学会等名: The Seventh International Meeting On Replicating Oncolytic Virus Therapeutics
  • 発表場所: Quebec City, Canada（Chateau Frontenac ）
• [備考] 研究内容紹介
  • URL: http://www.med.tottori-u.ac.jp/integbio/522/1198.html
• [備考] ウイルスで新しいがん療法の開発をめざす
  • URL: http://ganshien.umin.jp/public/research/main/nakamura/
• [備考] がんナビ
  • URL: http://medical.nikkeibp.co.jp/leaf/all/cancernavi/report/201301/528660_3.html