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2013 年度 実績報告書

損傷認識を人為的に促進し紫外線DNA損傷修復を飛躍的に高める手法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 24651052
研究機関奈良県立医科大学

研究代表者

杉浦 重樹  奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (40179130)

研究分担者 森 俊雄  奈良県立医科大学, 医学部, 研究教授 (10115280)
キーワード修復 / DNA 損傷 / シクロブタン 型 ダイマー / モノクローナル 抗体
研究概要

核へ移行し、結合することで シクロブタン 型 ダイマー (CPD) の歪みを大きくする低分子の抗 CPD 抗体を構築するため、抗 CPD モノクローナル 抗体産生細胞より クローニング した重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域 (VL) を ペプチドリンカー でつなぎ、さらに VL のC末に SV40 の核移行 シグナル (NLS) 続いて His-tag を付加した scFv を作製した。しかし構築した scFv の CPD に対する結合能は、本来の IgG 抗体より低下していた。そこで VH-CH1-NLS-His-tag または VL-CL-NLS-His-tag を各々分泌型である抗体発現用 ベクター に 組み込んだものを ミエローマ 細胞に co-transfection し、抗 CPD Fab 抗体産生細胞の樹立を試みた。その結果不安定ながら、抗 CPD Fab 抗体産生細胞を得ることが出来た。この Fab が CPD を特異的に認識することを、抗 His 抗体を2次抗体に使った ELISA アッセイ で確認することができた。
同時に 抗 CPD Fab 抗体発現による紫外線感受性の変化を調べるため、 VH-CH1-NLS-His-tag または VL-CL-NLS-His-tag を各々組み込んだ エピゾマール 型 ベクター を co-transfection し、抗 CPD Fab 抗体を発現する ヒト 骨髄腫細胞 U2OS を樹立した。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2014 2013

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Quantitative and in situ Detection of Oxidatively Generated DNA Damage 8,5'-Cyclo-2'-deoxyadenosine using an Immunoassay with a Novel Monoclonal Antibody2014

    • 著者名/発表者名
      Iwamoto, T. Brooks, P. J. Nishiwaki, T. Nishimura, K. Kobayashi, N. Sugiura, S. Mori, T.
    • 雑誌名

      Photochem Photobiol

      巻: XX ページ: XX

    • DOI

      10.1111/php.12239

    • 査読あり
  • [雑誌論文] TNF-alpha stimulates efficient JC virus replication in neuroblastoma cells2014

    • 著者名/発表者名
      Nukuzuma, S. Nakamichi, K. Kameoka, M. Sugiura, S. Nukuzuma, C. Tasaki, T. Takegami, T.
    • 雑誌名

      J Med Virol

      巻: XX ページ: XX

    • DOI

      10.1002/jmv.23886

    • 査読あり
  • [学会発表] Quantitative and in situ detection of oxidatively generated DNA damage 8,5’- cyclo- 2’-deoxyadenosine using an immunoassay with a novel monoclonal antibody2014

    • 著者名/発表者名
      Iwamoto, T. Brooks, P. J. Kobayashi, N. Sugiura, S. and Mori, T.
    • 学会等名
      nternational symposium on xeroderma pigmentosum and related diseases: Disorders of DNA damage response - Bench to bedside-
    • 発表場所
      Kobe
    • 年月日
      20140305-20140307
  • [学会発表] PARP-1 阻害剤の in vitro における JC ウイルス増殖抑制効果について2013

    • 著者名/発表者名
      奴久妻聡、亀岡正典、杉浦重樹、中道一生、奴久妻智代子、田崎隆史、竹上勉
    • 学会等名
      日本ウイルス学会
    • 発表場所
      神戸国際会議場
    • 年月日
      20131110-20131112

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公開日: 2015-05-28  

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