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2013 年度 実施状況報告書

シックハウス症候群感受性候補遺伝子の機能解明と疾患モデル動物開発

研究課題

研究課題/領域番号 24651064
研究機関東海大学

研究代表者

木村 穣  東海大学, 医学部, 教授 (10146706)

研究分担者 梶原 景正  東海大学, 医学部, 講師 (00204397)
坂部 貢  東海大学, 医学部, 教授 (70162302)
大塚 正人  東海大学, 医学部, 講師 (90372945)
キーワードシックハウス症候群 / 神経障害エステラーゼ / PNPLA6 / モデルマウス / OPIDN / 有機リン / 遺伝子操作マウス / トランスジェニックマウス
研究概要

遺伝子型相関解析の結果、シックハウス症候群の患者群のneuropathy target esterase(NTE:PNPLA6遺伝子にコードされる)の酵素活性が健常人に比べて高く、また患者群に特徴的な遺伝子型が存在することを明らかにした。環境要因の代表とされる有機リンに高感受性のニワトリと発生工学面で優れた遺伝子操作マウスを用いてシックハウス症候群発症のメカニズムを追求し、遺伝子と環境の相互作用に着眼した、新しい環境医学研究を開拓することを目的とする。
1.NTE(PNPLA6遺伝子産物)高発現細胞の作製(木村、梶原)一時的な高発現をCAGプロモーターを用いて実現すると共に、エピゾーマルベクターを用いてヒト胎児腎臓由来のHEK293細胞において20倍の活性を持つ細胞を株として樹立出来た。以後の実験のためにN末、C末にHIS-Tagを付加した株も同時に樹立し、高発現を確認した。2.高発現細胞株でのDDVP感受性(木村、梶原)高発現細胞株の増殖に特に異常はなく、また有機リンの一種であるDDVPの感受性はもとのHEK293細胞株と変わるところはなかった。3.DDVPによる高発現細胞でのNTE酵素活性変化(梶原、木村)高発現細胞において増殖に影響を与えない10μMDDVP投与を行ったが、NTE酵素活性は激減し、その後時間を経ると酵素活性が回復する傾向が見られた。4. マウスを利用したpnpla6遺伝子の機能解析(大塚、梶原、木村、坂部)発現を保証できる効率的な独自に開発した遺伝子導入マウス系を用い、8系統を得た。臓器あるいは発生時期でのNTE活性を測定し、臓器による差はあるもののいずれの場合も非遺伝子導入マウスの数倍以上の活性上昇を認めた。ただし、遺伝子の伝達率やモザイク発現の例から、極度な高発現は個体レベルでは何らかの悪影響を生み出すと考えられる。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

目的に向かっては順調に研究が進んでいる。特にトランスジェニックマウスが系統化出来たことは大きい。

今後の研究の推進方策

いくつかの実験系を提示しているが、我々が作製したトランスジェニックマウスに有機リンを投与し、急性期反応を調べると共に、OPIDNの症状が発生するかどうかを検証することが、この疾患を解析するためには一番重要と考える。また、高発現細胞株を樹立出来たことから、有機リンが結合したNTEの質量分析等を可能とする道が開けた。
今後は個体レベルデの解析と分子的な解析を中心に進めたい。

次年度の研究費の使用計画

物品費の納入価格等に変動があるなど費目間で過不足が生じたため。
ほとんどが物品費となる予定であるが、学内予算との関係で旅費、人件費も発生する可能性あり。繰越金は物品費用に充当して使用する予定。

  • 研究成果

    (13件)

すべて 2014 2013

すべて 雑誌論文 (6件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (6件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Qualitative measurement of pain by analyzing the salivary alpha amylase.2014

    • 著者名/発表者名
      Tsuchiya, K., Saidin, MYB., Inoue, T., Kajiwara, K and Kimura, M.
    • 雑誌名

      Precision Engineering

      巻: 38 ページ: 257-260

    • DOI

      http://dx.doi.org/10,1016/j.precisioneng.2013.09.006

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Interaction between carbon nanotubes and human cell.2014

    • 著者名/発表者名
      Tsuchiya, K., Iimori, S., Kajiwara, K. and Kimura, M.
    • 雑誌名

      Precision Engineering

      巻: 38 ページ: 116-120

    • DOI

      http://dx.doi.org/10,1016/j.precisioneng.2013.08.002

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Association of sick building syndrome with neuropathy target esterase(NTE) activity in Japanese.2013

    • 著者名/発表者名
      Matsuzaka, Y., Ohkubo, T., Yukie Y. Kikuti, Mizutani A., Tsuda, M., Aoyama, Y., Kakuta, K., Oka, A., Inoko, H., Sakabe, K., Ishikawa, S., Kulski, JK. and Kimura, M
    • 雑誌名

      Environmental Toxicology

      巻: - ページ: -

    • DOI

      10.1002/tox.21839

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Improved loop-mediated isothermal amplification for HLA-DRB1 genotyping using RecA and a restriction enzyme for enhanced amplification specificity2013

    • 著者名/発表者名
      Mitsunaga, S., Shimizu, S., Okudaira, Y., Oka., A., Tanaka, M., Kimura, M., Kulski, J.K. Inoue, I. and Inoko H.
    • 雑誌名

      Immunogenetics

      巻: 65 ページ: 405-415

    • DOI

      10.1007/s00251-013-0690-0

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination.2013

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuka, M., Miura, H., Hayashi, H., Nakaoka, H., Kimura, M.., Sato, M. and Gurumurthy , CB
    • 雑誌名

      Transgenic Research

      巻: 22 ページ: 873-875

    • DOI

      10.1007/s11248-013-9703-x

    • 査読あり
  • [雑誌論文] X-ray microtomographic visualization of Escherichia coli by metalloprotein overexpression2013

    • 著者名/発表者名
      Mizutani, R., Taguchi, K., Ohtsuka, M., Kimura, M., Takeuchi, A., Uesugi, K. and Suzuki, Y
    • 雑誌名

      Journal of Synchrotron Radiation

      巻: 20 ページ: 581-586

    • 査読あり
  • [学会発表] 22q11.2欠失症候群で欠失するヒトDGCR2遺伝子のTGF-β/BMP シグナルとの相互作用2013

    • 著者名/発表者名
      梶原景正、渡邊聡、麥倉信一郎、木村穣
    • 学会等名
      第36 回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      20131203-20131206
  • [学会発表] マウス繊維芽細胞においてSez12はTGF-ß シグナルに関与している2013

    • 著者名/発表者名
      麥倉信一郎、渡邊聡、梶原景正、木村穣
    • 学会等名
      第36 回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      20131203-20131206
  • [学会発表] pnpla6遺伝子と有機リン感受性ートランスジェニックマウス作製と遺伝子導入細胞の性質ー2013

    • 著者名/発表者名
      加賀谷 徹,大塚 正人,三浦 浩美,大久保 朋一,田中 正史,割田 貴之,本杉 奈美,坂部 貢,梶原 景正,加藤 明, 吉川 枝里,木村 穣
    • 学会等名
      第36 回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      20131203-20131206
  • [学会発表] 雄性不妊を呈するヒト疾患モデルマウスでの造精機能回復の試み2013

    • 著者名/発表者名
      本杉 奈美,亀山 洋子,木村 穣
    • 学会等名
      第36 回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      20131203-20131206
  • [学会発表] 有機リンの培養細胞に及ぼす効果について(1)2013

    • 著者名/発表者名
      割田貴之、本杉奈美、田中正史、大久保朋一、坂部貢、木村穣
    • 学会等名
      第22回日本臨床環境医学会学術集会
    • 発表場所
      東京(日本歯科大学東京短期大学)
    • 年月日
      20130608-20130609
  • [学会発表] Neuropathy target esterase(神経障害標的エステラーゼ)遺伝子導入マウスの作成2013

    • 著者名/発表者名
      加賀谷徹、割田貴之、三浦浩美、大塚正人、大久保朋一、坂部貢、木村穣
    • 学会等名
      第22回日本臨床環境医学会学術集会
    • 発表場所
      東京(日本歯科大学東京短期大学)
    • 年月日
      20130608-20130609
  • [図書] シックハウス症候群マニュアル2013

    • 著者名/発表者名
      木村穣
    • 総ページ数
      79の一部
    • 出版者
      東海大学出版会

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公開日: 2015-05-28  

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