蛋白質を用いた修飾ｔＲＮＡの調製法の開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24655145
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生体関連化学
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 田中 良和 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 准教授 (20374225)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: tRNA / 精製 / 修飾 / 結晶化 / 結晶構造解析

研究概要

本研究では，大腸菌体内で構成させたtRNA－蛋白質複合体を用いて，目的の成熟tRNAを簡便かつ高純度に調製する系を構築することを目指す．まず，大腸菌由来tRNA(Met)アセチルトランスフェラーゼ（E.coli TmcA）の変異体のうち，tRNAとの結合活性の高いK205A変異体を用いて，大腸菌体内からtRNA(Met)を調製する系を確立した．更に，その結晶化を行い，6Å程度の分解能の回折を与える結晶を得た．更に，セレン導入蛋白質とtRNA(Gln)，tRNA(Glu)，tRNA(Lys)の共発現系を構築し，生体内で形成される蛋白質－tRNA複合体から高純度のtRNAを調製した．

研究成果

• [雑誌論文] Direct interaction between EFL1 and SBDS is mediated by an intrinsically disordered insertion domain (2014)
  • 著者名/発表者名: Nozomi Asano, Haruka Atsuumi, Akiyoshi Nakamura, Yoshikazu Tanaka, Isao Tanaka, Min Yao
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 443 ページ: 1251-1256
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.12.143
  • 査読あり
• [雑誌論文] SCO4008, a Putative TetR Transcriptional Repressor from Streptomyces coelicolor A3 (2), Regulates Transcription of sco4007 by Multidrug Recognition (2013)
  • 著者名/発表者名: Takeshi Hayashi, Yoshikazu Tanaka, Naoki Sakai, Ui Okada, Min Yao, Nobuhisa Watanabe, Tomohiro Tamura and Isao Tanaka
  • 雑誌名: J. Mol. Biol. 巻: 425 ページ: 3289-3300
  • DOI: 10.1016/j.jmb.2013.06.013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structural and genomic DNA analysis of a putative transcription factor SCO5550 from Streptomyces coelicolor A3(2) : Regulating the expression of gene sco5551 as a transcriptional activator with a novel dimer shape (2013)
  • 著者名/発表者名: Takeshi Hayashi, Yoshikazu Tanaka, Naoki Sakai, Nobuhisa Watanabe, Tomohiro Tamura, Isao Tanaka, Min Yao
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 435 ページ: 28-33
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.04.017
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure of dihydrouridine synthase C (DusC) from Escherichia coli (2013)
  • 著者名/発表者名: Minghao Chen, Jian Yu, Yoshikazu Tanaka, Miyuki Tanaka, Isao Tanaka and Min Yao
  • 雑誌名: Acta Cryst. 巻: F69 ページ: 834-838
  • DOI: 10.1107/S1744309113019489
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystal Structure of Enzyme CapF of Staphylococcus aureus Reveals a Unique Architecture Composed of Two Functional Domains (2013)
  • 著者名/発表者名: Takamitsu Miyafusa, Jose M. M. Caaveiro, Yoshikazu Tanaka and Kouhei Tsumoto
  • 雑誌名: Biochem J. 巻: 443 ページ: 671-680
  • DOI: 10.1042/BJ20112049
  • 査読あり
• [雑誌論文] Application of photoactive yellow protein as a photoresponsive module for controlling hemolytic activity of staphylococcalα-hemolysin (2012)
  • 著者名/発表者名: Mihoko Ui, Yoshikazu Tanaka, Yasuyuki Araki, Takehiko Wada, Toshiaki Takei, Kouhei Tsumoto, Sumire Endo and Kazushi Kinbara
  • 雑誌名: Chem. Commun. 巻: 48 ページ: 4737-4739
  • DOI: 10.1039/c2cc18118e
  • 査読あり
• [雑誌論文] P19 embryonal carcinoma cells exhibit high sensitivity to botulinum type C and D/C mosaic neurotoxins (2012)
  • 著者名/発表者名: Kentaro Tsukamoto, Hideyuki Arimitsu, Sadayuki Ochi, Keiji Nakamura, Yoshikazu Tanaka, Nipawan Nuemket, Koki Taniguchi, Shunji Kozaki and Takao Tsuji
  • 雑誌名: Microbiol. and Immunol. 巻: 56 ページ: 664-672
  • DOI: 10.1111/j.1348-0421.2012.00490.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] The binding mechanism of eIF2βwith its partner proteins, eIF5 and eIF2Bε (2012)
  • 著者名/発表者名: Zuoqi Gai, Yumie Kitagawa, Yoshikazu Tanaka, Nobutaka Shimizu, Keisuke Komoda, Isao Tanaka, Min Yao
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 423 ページ: 515-519
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.05.155
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystal structure of a putative methyltransferase SAV1081 from Staphylococcus aureus (2012)
  • 著者名/発表者名: Shunsuke Kita, Yoshikazu Tanaka, Nagisa Hirano, Satoshi Kimura, Takeo Suzuki, Tsutomu Suzuki, Min Yao, and Isao Tanaka
  • 雑誌名: Protein & Pept. Lett. 巻: 20 ページ: 530-537
  • 査読あり
• [学会発表] Crystal structure analysis of a DING protein, International life-science symposium for young scientists (2014)
  • 著者名/発表者名: Zuoqi Gai, Akiyoshi Nakamura, Yoshikazu Tanaka, Nagisa Hirano, Isao Tanaka, and Min Yao
  • 学会等名: Faculty of Science
  • 発表場所: Hokkaido University (Sapporo, Japan)
  • 年月日: 2014-03-03
• [備考]
  • URL: http://altair.sci.hokudai.ac.jp/g6/index.html