|
本研究では淡水産巻貝Lymnaea stagnalisの左右巻型決定遺伝子の機能解析に必要なトランスジェニック巻貝作出法の確立を目指した。巻貝の左右巻型は母性因子である巻型決定遺伝子の働きにより、まだzygoticな転写が開始する前の第3卵割時の割球配置パターンで決定するため、トランスジェニック個体の作成による解析手法が最も有効である。
先ずは蛍光タンパク質をレポーターとして組み込んだ発現ベクターを作製し、遺伝子導入法の検討を行った。その結果、受精卵へのマイクロインジェクションによる直接的な導入法によってのみ、レポーター遺伝子の蛍光を確認することができた。成貝の生殖巣への遺伝子導入も試みたが良好な結果は得られなかった。そのため、受精卵にマイクロインジェクションで外来遺伝子を導入し、それを成貝まで成長させた中からトランスジェニック個体を選別する方法を採用することにした。
最終年度には、発現ベクターのプロモーターについての検討も行った。この巻貝種では一般的なCMVプロモーターを用いた発現ベクターを初期胚に導入した場合、レポーター遺伝子が過剰に発現して正常な発生が妨げられることが分かった。そこで、内在性のアクチンプロモーターを組み込んだ発現ベクターを作製して用いたところ、蛍光タンパク質を発現させながらも正常に発生を進行させることが可能になった。未だ、内在性アクチンプロモーター発現ベクターの遺伝子導入胚を成貝まで成長させるには至っていないが、今後も継続していく計画である。また、発現ベクターの作製には成功したので、今後はより効率よくゲノム中に取り込まれるための工夫を検討していきたいと考えている。
|
