|
高活性型人工ヌクレアーゼPlatinum TALENを用いてウニPiwi遺伝子の破壊を試みた。Piwi遺伝子を標的とするPlatinum TALENを構築し、その mRNAを導入したウニ胚を観察したところ、Piwiの翻訳を抑制するモルフォリノアンチセンスオリゴを導入した胚と同様に、ほとんどの胚において成体原基が欠失していた。また、標的配列をPCRで増幅し、変異導入の有無を解析したところ、70％以上のゲノムに欠失変異が導入されていた。これらの結果から、Platinum TALENを用いた解析によって、後期発生における遺伝子機能解析が可能であることが証明された。
Platinum TALENを用いたホヤの体細胞および生殖細胞でのゲノム編集効率を調べたところ、生殖細胞において高い変異導入が見られた。この結果は、ホヤにおいてPlatinum TALENを用いた変異体作製が可能であることを示すものであり、今後の変異系統の確立に重要な情報を得ることができた。
アフリカツメガエルにおいてPlatinum TALENが高い変異導入効果を示すことが、以前の我々の研究によって示されていた。今回、２倍体のネッタイツメガエルにおいて、Platinum TALENを用いた甲状腺ホルモン受容体アルファの破壊を行い、発生におけるこの受容体の機能解明に成功した。本研究によって、Platinum TALENによる遺伝子破壊は様々な生物において有効であることが示された。
|
