| 研究課題/領域番号 |
24658188
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| 研究機関 | 独立行政法人産業技術総合研究所 |
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研究代表者 |
森田 直樹 独立行政法人産業技術総合研究所, 生物プロセス研究部門, 研究グループ長 (60371085)
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| 研究分担者 |
佐原 健彦 独立行政法人産業技術総合研究所, 生物プロセス研究部門, 主任研究員 (40357166)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | ドコサペンタエン酸 / ラビリンチュラ微生物 / ポリシストロニック発現 / 出芽酵母 / 高度不飽和脂肪酸 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）生産海洋性ラビリンチュラ微生物のＤＰＡ合成機構の解明を最終目標とし、１）ＤＰＡ合成に関与する遺伝子（群）の単離、及び２）出芽酵母におけるＤＰＡ合成酵素遺伝子群のポリシストロニックな発現を実現することを目指している。
当初は、既知のポリケチド合成酵素（ＰＫＳ）様高度不飽和脂肪酸合成酵素遺伝子の情報を基に縮合プライマーをデザインし、ＲＴ－ＰＣＲ法及びＲＡＣＥ法により目的の遺伝子の増幅を試みる予定であったが、ＤＰＡ生産海洋性ラビリンチュラ微生物Ｌ５９株よりゲノムＤＮＡを抽出、次世代シークエンサーを用いてドラフトＤＮＡ配列を決定し、その配列を解析することによって、ＤＰＡ合成酵素群をコードする遺伝子領域を確認することにした。
Ｌ５９株は細菌（特にサイクロバクタ－属細菌ＬＢ００４株）との混合培養によって増殖が活性化される。混合培養した菌体の脂肪酸組成をガスクロマトグラフィーで分析したところ、ＤＰＡが検出できない事態となった。寒天培地上での培養や液体培地での培養等、様々な培養条件を検討したが、改善に至っていない。
菌株保存機関に菌株Ｌ５９株の再分譲を依頼中であるが、未だ入手できていない。また、寒天ブロック片として保存してあったＬ５９株菌体を入手し、そこからゲノムＤＮＡの調製を試みている。
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