アポトーシス阻害因子遺伝子導入と異種移植による卵巣内潜在的卵母細胞の救命法の創出

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24658231
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 眞鍋 昇 東京大学, 農学生命科学研究科, 教授 (80243070)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 卵巣 / 卵胞 / 顆粒層細胞 / 卵巣内潜在的卵子 / アポトーシス / アポトーシス阻害因子 / 細胞死リガンド・受容体系 / カスパーゼ

研究実績の概要

近年家畜においても様々な動物発生工学技術が編み出され、体細胞クローン羊やプリオン遺伝子ノックアウトウシのような人為的に操作した家畜を作出できるようになってきた。しかしこれらに供する高品質の卵母細胞（卵子）が不足しており、その確保は急務である。家畜の卵胞とそれに内含される卵母細胞の死滅を調節している数々の細胞内のアポトーシス阻害因子を探索して、その制御機構を解明する過程でいくつかが細胞死を阻害することで卵胞・卵母細胞の死滅を支配的に調節していることがわかってきた。本研究で、細胞死阻害因子の遺伝子を食肉処理場で得た卵胞上皮細胞に導入して卵胞閉鎖を阻害し、これを異種移植して救命して利用する潜在的卵母細胞救命法を創出しようとするものである。細胞死阻害因子を調節している因子の探索を進めた。併行して、アポトーシス阻害因子の発現を人為的に調節することで卵胞と卵子の救命が可能であることの確認をすすめた。家畜の卵巣組織の細片への一過性の遺伝子導入法を検討するとともに、凍結保存卵巣組織細片の免疫不全マウス腎漿膜下腔への異種移植とそこでの卵胞発育ならびにこのようにして得た卵子の体外成熟と体外受精および胚の発育能の評価も進め、卵巣組織の凍結保存とそれからの卵巣内潜在的卵子の回収システムの構築を進めた。研究の過程で異種移植を腎漿膜下におこなった場合に、移植細片の保持はよいものの、そこから発育する卵胞に対して丈夫な漿膜が阻害的に作用するので、昨年度から継続して漿膜に小穴を開くなどの術式の工夫などを重ねるなどして、一層優れたシステムの改築を遂行した。また救命因子として遺伝子導入などの煩瑣なプロセスを要しないと考えられる可溶性受容体の有用性の可否の検討もすすめた。

研究成果

• [雑誌論文] 好気性超高温発酵堆肥の抗大腸菌群効果の検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 9.小堤悠平，長峰孝文，高橋友継，畠中哲哉，道宗直昭, 眞鍋昇
  • 雑誌名: 畜産環境学会誌 巻: 14 ページ: 1-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expressions of tumor necrosis factor-α, its receptor I, II and receptor-associated factor 2 in the porcine corpus luteum during the estrous cycle and early pregnancy (2014)
  • 著者名/発表者名: 3.Chie Suzuki, Koji Yoshioka, Manabu Yamada, Michiko Noguchi, Noboru Manabe
  • 雑誌名: Veterinary Research Communications 巻: 38 ページ: 1-10
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cutting edge of bovine reproductive technology: Production of prion gene KO cow to prevent spontaneous BSE (2014)
  • 著者名/発表者名: 1.Noboru Manabe, Ichiro Onoyama, Yutaka Sendai, Yoshito Aoyag
  • 雑誌名: The Thai Journal of Veterinary Medicine 巻: 44 ページ: 105-110
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Effect of radionuclides due to the accident of the Fukushima Daiichi Nuclear Power Plant on the recycling agriculture including livestock (2014)
  • 著者名/発表者名: 3.Noboru Manabe, Tomotusgu Takahashi, Junyou Li, Keitarou Tanoi, Tomoko Nakanishi
  • 雑誌名: New Food Industry 巻: 56 ページ: 45-50
• [雑誌論文] Increased collagen III in culled chicken meat after feeding dietary wood charcoal and vinegar contributes to palatability and tenderness (2014)
  • 著者名/発表者名: 4.Kohsyo Yamauchi, Noboru Manabe, Yoshiki Matsumoto, Shin-Ichi Takenoyama, Koh-En Yamauchi
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: 85 ページ: 468-480
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Method for determination of histamine in food by LC-MS/MS (2014)
  • 著者名/発表者名: 5.Yoshito Ohtsubo, Hiroyuki Kurooka, Hisae Tada, Noboru Manabe
  • 雑誌名: Journal of Food Hygiene and Safety Science 巻: 55 ページ: 103-109
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Hallmarks of hepatitis C virus in equine hepaciviru (2014)
  • 著者名/発表者名: 6.Tomohisa Tanaka, Hirotake Kasai, Atsuya Yamashita, Kaori Okuyama-Dobashi, Jun Yasumoto, Shinya Maekawa, Nobuyuki Enomoto, Toru Okamoto, Yoshiharu Matsuura, Masami Morimatsu, Noboru Manabe, Kazuhiko Ochiai, Kazuto Yamashita, Kohji Moriishi
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 88 ページ: 13352-13366
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 原発事故に関わる家畜と畜産物の安全性について (2014)
  • 著者名/発表者名: 7.眞鍋昇，高橋友継，李俊佑，田中哲弥，田野井慶太朗，中西友子
  • 雑誌名: 畜産の研究 巻: 68 ページ: 1085-1090
• [雑誌論文] 畜産物の安全」を重視した畜産廃棄物処理の将来 (2014)
  • 著者名/発表者名: 眞鍋昇，高橋友継，李俊佑
  • 雑誌名: 畜産の研究 巻: 68 ページ: 447-451
• [学会発表] Stages of seminiferous epithelium cycle and rate of germ cell apoptosis in adult testis of Japanese native Shiba goat (2014)
  • 著者名/発表者名: Ahsan AKM Kabir, Yasufumi Goto, Ichiro Onayama, Zubaida Gulshan, Jun-You Li, Noboru Manabe
  • 学会等名: The 16th AAAP Animal Science Congress
  • 発表場所: Yogyakarta, Indonesia
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-14
• [学会発表] Production of prion gene knockouted cow to prevent spontaneous bovine spongiform encephalopathy (2014)
  • 著者名/発表者名: Noboru Manabe, Ichiro Onoyama, Tetsuya Tanaka, Jyunyou LI, Kannika Wongpanit, Yutaka Sendai, Yoshito Aoyagi
  • 学会等名: The 16th AAAP Animal Science Congress
  • 発表場所: Yogyakarta, Indonesia
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-14
• [学会発表] Characteristics of prion KO cow against spontaneous bovine spongiform encephalopathy (2014)
  • 著者名/発表者名: Noboru Manabe, Ichiro Onoyama, Tetsuya Tanaka, Jyunyou LI, Kannika Wongpanit, Yutaka Sendai, Yoshito Aoyagi.
  • 学会等名: The 11th Annual Meeting of Asian Reproductive Biotecnology Society
  • 発表場所: Bangkok, Thailand
  • 年月日: 2014-11-03 – 2014-11-08
• [学会発表] Changes in expression and localization of cellular flice-like inhibitory protein (cFLIP), an anti-apoptotic factor, in corpora lutea during estrus cycle and pregnancy in Thai swamp buffalo (Bubalus bubalis) (2014)
  • 著者名/発表者名: Kannika Wongpanit, Panuwat Khumpeerawat, Narisa phonrachom, Pakawadee Pongket, Noboru Manabe
  • 学会等名: The 11th Annual Meeting of Asian Reproductive Biotecnology Society
  • 発表場所: Bangkok, Thailand
  • 年月日: 2014-11-03 – 2014-11-08
• [学会発表] Critical role of decoy receptor 3 in regulation of granulosa cell apoptosis in pig ovarian follicle (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshinosuke Fukumoto, Miki Sugimoto, Ichiro Onoyama, Kannika Wongpanit, Noboru Manabe
  • 学会等名: The 3rd World Congress of Reproductive Biology
  • 発表場所: Edinburgh, United Kingdom
  • 年月日: 2014-09-02 – 2014-09-04
• [学会発表] Production of prion gene knockout cow to prevent spontaneous bovine spongiform encephalopathy (2014)
  • 著者名/発表者名: Noboru Manabe, Ichiro Onoyama, Junyou Li, Yutaka Sendai, Yoshito Aoyagi
  • 学会等名: The 3rd World Congress of Reproductive Biology
  • 発表場所: Edinburgh, United Kingdom
  • 年月日: 2014-09-02 – 2014-09-04
• [学会発表] Native pig breeds in focus of reproductive research (2014)
  • 著者名/発表者名: József Rátky, István Egerszegi, Soukanh Keonuchan, Klaus-Peter Brüssow, Taku Nagai, Kazuhiro Kikuchi, Tamas Somfai, Noboru Manabe
  • 学会等名: International Symposium “Preservation and Utilization of Indigenous Breeds and Their Usage in Pigs”
  • 発表場所: 帯広市・日本
  • 年月日: 2014-08-24 – 2014-08-25
  • 招待講演
• [学会発表] Bcl-2 members are involved in granulosa cell apoptosis during follicular atresia in saws (2014)
  • 著者名/発表者名: Noboru Manabe, Takafumi Sai, Fuko Matsuda, Ichiro Onoyama, Jun-You Li
  • 学会等名: International Symposium on Recent Progress in Swine Breeding and Raising Technologies
  • 発表場所: Tainan, Republic of China (Taiwan)
  • 年月日: 2014-06-02 – 2014-06-07
  • 招待講演
• [学会発表] Cutting edge of bovine reproductive technology: Production of prion gene KO cow to prevent spontaneous BSE (2014)
  • 著者名/発表者名: Noboru Manabe, Ichiro Onoyama, Yutaka Sendai, Yoshito Aoyagi
  • 学会等名: Symposium of the Thai Society for Animal Reproduction
  • 発表場所: Bngkok, Thailand
  • 年月日: 2014-04-20 – 2014-04-21
  • 招待講演
• [図書] 獣医組織学第６版・第１４章雌の生殖器 (2014)
  • 著者名/発表者名: 眞鍋昇, 木村順平, 大塚沙織
  • 総ページ数: 364
  • 出版者: 学窓社
• [備考] 東京大学大学院農学生命科学研究科附属牧場
  • URL: http://www.bokujo.a.u-tokyo.ac.jp/