オウム病クラミジアの増殖環を制御するｎｃＲＮＡのトランスクリプトーム解析

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24658255
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 大屋 賢司 岐阜大学, 応用生物科学部, 准教授 (50402219)
• 研究分担者: 福士 秀人 岐阜大学, 応用生物科学部, 教授 (10156763)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 偏性細胞内寄生細菌 / クラミジア / 人獣共通感染症 / 細胞内増殖 / RNAseq

研究実績の概要

クラミジアは偏性細胞内寄生性を示し、宿主細胞中で感染性粒子である基本小体（EB）から増殖能を示す網様体（RB）への性状転換を伴うユニークな増殖環を有する。増殖環は属・種間で多様性が認められ、多様な宿主域や病原性にも関連すると考えられる。申請課題では、クラミジアの増殖環の制御機構を明らかにすることを目的とし、特にnon-coding RNA (ncRNA)による遺伝子制御機構に着目することとした。これまでに、すでにゲノム配列を決定済みのChlamydia psittaci国内分離株mat116を経時的に感染させた細胞より全RNAを抽出した。市販のキットを用いて、全RNAより細菌由来RNAを濃縮し、RNAseqを行った。しかしながら、リードの大部分は宿主由来のものであり、mat116株ゲノムにマッピングされたリードは殆ど認められなかった。次に、酵素を用いて、宿主及びクラミジアのrRNAを特異的に分解する方法を検討したが、効果は認められなかった。最終年度は、これまでの検討結果と学会・論文で入手した情報を元に、細胞破壊と、マグネチックビーズを用いた宿主mRNAと宿主・細菌rRNAの除去を組み合わせてサンプル調製を行いRNAseq解析に供したところである。得られるデータの解析については、分担者が他の病原体を用いて行った方法に準じて行っている。研究期間を通じてサンプル調製に難航し目標達成は出来なかったが、他の細菌のRNAseq解析に比べ、偏性細胞内寄生細菌については、外国のグループも含め殆ど報告が無く、本研究で得られたノウハウは貴重な情報になったと考えている。次年度以降は、他のプロジェクトで引き続きクラミジアのRNAseq解析とncRNAの同定を行う予定である。mat116株の細胞内増殖機構解明だけでなく、由来・病原性の異なるクラミジア他種株との比較検討も計画している。

研究成果

• [雑誌論文] Genetic and antigenic analysis of Chlamydia pecorum strains isolated from calves with diarrhea. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohtani A, Kubo M, Shimoda H, Ohya K, Iribe T, Ohishi D, Endoh D, Omatsu T, Mizutani T, Fukushi H, Maeda K
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0585
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] オウム病 (2014)
  • 著者名/発表者名: 福士秀人
  • 雑誌名: 公衆衛生情報 巻: 44 ページ: 20-21
• [雑誌論文] Intracellular localization of Equine herpesvirus type 1 tegument protein VP22. (2014)
  • 著者名/発表者名: Okada A, Kodaira A, Hanyu S, Izume S, Ohya K, Fukushi H
  • 雑誌名: Virus Res. 巻: 192 ページ: 103-113
  • DOI: 10.1016/j.virusres.2014.08.006.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Full genome sequences of zebra-borne equine herpesvirus type 1 isolated from zebra, onager and Thomson's gazelle. (2014)
  • 著者名/発表者名: Guo X, Izume S, Okada A, Ohya K, Kimura T, Fukushi H
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 76 ページ: 1309-1312
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0183
  • 査読あり / オープンアクセス