細胞特異的ＲＮＡｉコレクションを用いたエストロゲンのシグナル伝達経路の解明

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24659107
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 環境生理学(含体力医学・栄養生理学)
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 坂口 修一 山口大学, 大学研究推進機構, 助教 (90363093)
• 研究分担者: 水上 洋一 山口大学, 大学研究推進機構, 教授 (80274158)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: RNAiコレクション / エストロゲン / シグナル伝達経路

研究概要

女性ホルモンであるエストロゲンはカルシウム応答やNO産生など早期応答にも関与していることが知られているがその詳細は不明である。GPCRやキナーゼに対するRNAiライブラリーによるアッセイシステムを確立し、そのメカニズム、シグナル経路の解明を行った。
ロボットアッセイシステムを開発し、９６wellプレートでの同時大量測定が可能になった。エストロゲンの応答は刺激によって顕著な結果が得られたミトコンドリア膜電位を測定した。その結果、GPCRの一部の遺伝子で細胞応答が抑制される遺伝子群や促進される遺伝子群が検出された。しかし、これらのデータはばらつきがあり、さらに別の方法で検証する必要があるだろう。

研究成果

• [雑誌論文] Alterations in cardiacβ-catenin precede connexin gap junction remodeling in cardiomyocytes exposed to rapid electrical stimulation (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakashima, T., Ohkusa T., Yoshida M., Lee J.-K., Mizukami Y., Yano M.
  • 雑誌名: Am. J. Physiol. (Heart and Circulatory Physiology) 巻: 306 (9)(Epub) ページ: 1324-33
  • DOI: 10.1152/ajpheart.00653
  • 査読あり
• [学会発表] 次世代DNAシーケンサー解析ソフトの違いによるバリアントの検出 (2013)
  • 著者名/発表者名: 坂口修一,吉田貢太,渡邉健司,遠山卓,坂井勇介,水上洋一
  • 学会等名: 日本分子生物学会総会
  • 発表場所: 神戸(神戸国際展示場)
  • 年月日: 20131203-06
• [学会発表] 疾患で同定されたエストロゲン細胞膜受容体GPER/GPR30変異タンパク質は蛋白分解を介して細胞増殖を制御している (2013)
  • 著者名/発表者名: 遠山卓,宇留島裕,坂井勇介,山本初実,吉田貢太,山野聖子,渡邊健司,濱野公一,水上洋一
  • 学会等名: 日本分子生物学会総会
  • 発表場所: 神戸(神戸国際展示場)
  • 年月日: 20131203-06
• [学会発表] Increased sialylation of a recombinant IgG mutant produced in human embryonic kidney 293 (HEK293) cells Abstract (2013)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Mimura, Ronan Kelly, Louise Unwin, Simone Albrecht, Yoichi Mizukami, Margaret Goodall, Tsuneo Matsumoto, Roy Jefferis, Pauline M Rudd
  • 学会等名: 15^<th> ICI
  • 年月日: 20130822-27
• [学会発表] Cancer Panelを用いた遺伝子変異解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一
  • 学会等名: Ion Torrent User Meeting 2013
  • 発表場所: 大阪(メルパルク大阪)
  • 年月日: 2013-07-10
• [学会発表] 子宮筋腫で検出されたエストロゲン細胞膜受容体GPR30/GPERの新規SNPは細胞増殖を促進する (2012)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一,相原正宗,遠山卓,佐藤俊,井上雄太郎,山縣芳明,田村功,前川亮,西岡弘子,緒方勤,嶋雄一,諸橋憲一郎,杉野法広
  • 学会等名: 日本分子生物学会総会
  • 発表場所: 福岡(マリンメッセ福岡)
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] 次世代DNAシーケンサーSOLiD5500を用いた乳ガンでのエストロゲン受容体を誘導する遺伝子変異の探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 狩生徹,西岡弘子,畑中千春,坂口修一,井上雄太郎,山本滋,岡正朗,水上洋一
  • 学会等名: 日本分子生物学会総会
  • 発表場所: 福岡(マリンメッセ福岡)
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] 次世代シークエンサーを用いた子宮筋腫におけるガン関連遺伝子のスクリーニング (2012)
  • 著者名/発表者名: 井上雄太郎,遠山卓,狩生徹,山縣芳明,前川亮,田村功,山野聖子,杉野法広,水上洋一
  • 学会等名: 日本分子生物学会総会
  • 発表場所: 福岡(マリンメッセ福岡)
  • 年月日: 20121211-14
• [図書] —次世代シーケンサーの現状と問題点について-,遺伝子・DNA利用も製品開発におけるガイドラインでは分からない規制・倫理対応と解析、操作技術のトラブル対策 (2014)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一,渡邊健司,坂口修一
  • 出版者: 技術情報協会編(印刷中)