ＨＳＰ９０の慢性炎症誘発・維持機構

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24659165
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 佐藤 昇志 札幌医科大学, 医学部, 教授 (50158937)
• キーワード: HSP90 / 慢性炎症 / ERO1-α / HSP90レセプター / エンドサイトーシス / 初期エンドソーム

研究概要

1. 細胞外Hsp90 (exHsp90) レセプターのクローニング
平成２５年度は、マウス未熟樹状細胞細胞からcDNAライブラリーを調整し、レトロウイルスベクターpLIBにクローニングした。約１０万クローンのライブラリーをPLAT-E細胞に導入し、その４８時間後の培養上清を回収し、マウス形質細胞腫であるP3U1に感染させた。これをHsp90をコーティングしたプレートに添加し、パニング法を用いて、付着細胞由来のコロニーを１０個以上得た。この細胞から、cDNAライブラリー由来の遺伝子をPCRを用いて増幅し、シークエンスを行った。その結果、Endoplasmic reticulum oxidoreduction 1-α (ERO1-α)を同定した。このERO1-αは小胞体局在蛋白質であることが知られているが、小胞体局在シグナルを持たない分子であり、細胞膜あるいは分泌されうる可能性が考えられた。そこで、受容体として機能するか、まず細胞表面上の発現の有無を確認した。ERO1-αの組換え蛋白質を作製し、マウスに免疫し、単クローン抗体を作製した。この抗体を用いて、樹状細胞表面での発現を検討すると、確かに細胞表面での発現を認めた。ERO1-αは、マウスとヒトのアミノ酸レベルで、79.8 ％の高い相同性を持つため、本抗体を用いて、ヒト樹状細胞においても受容体として機能しているか、検討する予定である。
2. exHsp90のレセプター媒介性エンドサイトーシス
Alexa488で、蛍光色素標識したHsp90をマウス樹状細胞に添加して、その細胞内局在を時空間的に解析した。その結果、exHsp90は、初期エンドソームに貯留後、時間経過とともにエンドソームを脱出し、プロテアソームと共局在することが示された。抗Hsp90抗体を用いた結果から、exHsp90のエンドソーム脱出には、内在性のHsp90が重要な役割を果たしていることが示された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

上で記したごとく、本研究によりHsp90の樹状細胞受容体候補Endoplasmic reticulum oxidoreduction 1-α (ERO1-α)を同定することが出来た。現在、単クローン抗体を作製してさらに詳細に検討を行っている。これらの研究成果によりHsp90の慢性炎症機構における役割がより明瞭に見えてくるものと期待しているところである。以上のように、本研究における現在までの達成度はおおむね計画通りであると考える。

今後の研究の推進方策

今後、この抗体を用いて、マウスおよびヒトのHsp90の樹状細胞への結合および取り込み抑制およびERO1-αを介する樹状細胞内取り込み後の細胞内局在を検討する。これらを通し、Hsp90の炎症機構における役割の詳細、また炎症性病態、病変での役割、あるいはこの機構を利用した炎症性疾患への治療創薬への研究進展などへの方向性が見えてくると思われる。

研究成果

• [雑誌論文] ERAAP and tapasin independently edit the amino and carboxyl termini of MHC class I peptides. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanaseki T, Lind KC, Escobar H, Nagarajan N, Reyes-Vargas E, Rudd B, Rockwood AL, Van Kaer L, Sato N, Delgado JC, Shastri N.
  • 雑誌名: J Immunol. 巻: Aug 15;191(4) ページ: 1547-55
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1301043
  • 査読あり
• [雑誌論文] High Expression of CD109 Antigen Regulates the Phenotype of Cancer Stem-Like Cells/Cancer-Initiating Cells in the Novel Epithelioid Sarcoma Cell Line ESX and Is Related to Poor Prognosis of Soft Tissue Sarcoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Emori M, Tsukahara T, Murase M, Kano M, Murata K, Takahashi A, Kubo T, Asanuma H, Yasuda K, Kochin V, Kaya M, Nagoya S, Nishio J, Iwasaki H, Sonoda T, Hasegawa T, Torigoe T, Wada T, Yamashita T, Sato N.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: Dec 20;8(12) ページ: e84187
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0084187
  • 査読あり
• [雑誌論文] Potential Survival Benefit of Anti-Apoptosis Protein: Survivin-Derived Peptide Vaccine with and without Interferon Alpha Therapy for Patients with Advanced or Recurrent Urothelial Cancer-Results from Phase I Clinical Trials. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanaka T, Kitamura H, Inoue R, Nishida S, Takahashi-Takaya A, Kawami S, Torigoe T, Hirohashi Y, Tsukamoto T, Sato N, Masumori N.
  • 雑誌名: Clin Dev Immunol. 巻: Epub 2013 Nov 20 ページ: 2013:262967
  • DOI: 10.1155/2013/262967
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ectopically expressed variant form of sperm mitochondria-associated cysteine-rich protein augments tumorigenicity of the stem cell population of lung adenocarcinoma cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi A, Hirohashi Y, Torigoe T, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kochin V, Saijo H, Kubo T, Nakatsugawa M, Asanuma H, Hasegawa T, Kondo T, Sato N.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 2013 Nov 11;8(11) ページ: e69095
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0069095
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ovarian cancer stem cells are enriched in side population and aldehyde dehydrogenase bright overlapping population. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yasuda K, Torigoe T, Morita R, Kuroda T, Takahashi A, Matsuzaki J, Kochin V, Asanuma H, Hasegawa T, Saito T, Hirohashi Y, Sato N.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 2013;8(8) ページ: e68187
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0068187
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of ECRG4 is associated with lower proliferative potential of esophageal cancer cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Matsuzaki J, Torigoe T, Hirohashi Y, Tamura Y, Asanuma H, Nakazawa E, Saka E, Yasuda K, Takahashi S, Sato N.
  • 雑誌名: Pathol Int. 巻: 63(8) ページ: 391-7
  • DOI: 10.1111/pin.12079
  • 査読あり
• [雑誌論文] Small proline-rich protein-1B is overexpressed in human oral squamous cell cancer stem-like cells and is related to their growth through activation of MAP kinase signal. (2013)
  • 著者名/発表者名: Michifuri Y, Hirohashi Y, Torigoe T, Miyazaki A, Fujino J, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kobayashi J, Sasaki T, Takahashi A, Nakamori K, Yamaguchi A, Hiratsuka H, Sato N.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 439(1) ページ: 96-102
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.08.021
  • 査読あり
• [雑誌論文] Six-transmembrane epithelial antigen of the prostate-1 plays a role for in vivo tumor growth via intercellular communication. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto T, Tamura Y, Kobayashi JI, Kamiguchi K, Hirohashi Y, Miyazaki A, Torigoe T, Asanuma H, Hiratsuka H, Sato N.
  • 雑誌名: Exp Cell Res. 巻: 319(17) ページ: 2617-26
  • DOI: 10.1016/j.yexcr.2013.07.025
  • 査読あり
• [雑誌論文] ALDH1-High Ovarian Cancer Stem-Like Cells Can Be Isolated from Serous and Clear Cell Adenocarcinoma Cells, and ALDH1 High Expression Is Associated with Poor Prognosis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kuroda T, Hirohashi Y, Torigoe T, Yasuda K, Takahashi A, Asanuma H, Morita R, Mariya T, Asano T, Mizuuchi M, Saito T, Sato N.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 2013 Jun 6;8(6) ページ: e65158
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0065158
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human Endoplasmic Reticulum Oxidoreductin 1-α (hERO1-α) is a Novel Predictor for Poor Prognosis of Breast Cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kutomi G, Tamura Y, Tanaka T, Kajiwara T, Kukita K, Ohmura T, Shima H, Takamaru T, Satomi F, Suzuki Y, Torigoe T, Sato N, Hirata K.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 104(8) ページ: 1091-6
  • DOI: 10.1111/cas.12177
  • 査読あり
• [雑誌論文] Constitutive expression and activation of stress response genes in cancer stem-like cells/tumour initiating cells: Potent targets for cancer stem cell therapy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Torigoe T, Hirohashi Y, Yasuda K, Sato N.
  • 雑誌名: Int J Hyperthermia. 巻: 29(5) ページ: 436-41
  • DOI: 10.3109/02656736
  • 査読あり
• [雑誌論文] Resveratrol inhibits fibrogenesis and induces apoptosis in keloid fibroblasts. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ikeda K, Torigoe T, Matsumoto Y, Fujita T, Sato N, Yotsuyanagi T.
  • 雑誌名: Wound Repair Regen. 巻: 21(4) ページ: 616-23
  • DOI: 10.1111/wrr.12062
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preferential expression of cancer/testis genes in cancer stem-like cells: proposal of a novel sub-category, cancer/testis/stem gene. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamada R, Takahashi A, Torigoe T, Morita R, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kubo T, Watarai K, Kondo T, Hirohashi Y, Sato N.
  • 雑誌名: Tissue Antigens. 巻: 81(6) ページ: 428-34
  • DOI: 10.1111/tan.12113
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prostate cancer stem-like cells/cancer-initiating cells have an autocrine system of hepatocyte growth factor. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishida S, Hirohashi Y, Torigoe T, Inoue R, Kitamura H, Tanaka T, Takahashi A, Asanuma H, Masumori N, Tsukamoto T, Sato N.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 104(4) ページ: 431-6
  • DOI: 10.1111/cas.12104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Immunotherapeutic benefit of α-interferon (IFNα) in survivin2B-derived peptide vaccination for advanced pancreatic cancer patients. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kameshima H, Tsuruma T, Kutomi G, Shima H, Iwayama Y, Kimura Y, Imamura M, Torigoe T, Takahashi A, Hirohashi Y, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Sato N, Hirata K.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 104(1) ページ: 124-9
  • DOI: 10.1111/cas.12046
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear, but not cytoplasmic, localization of survivin as a negative prognostic factor for survival in upper urinary tract urothelial carcinoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kitamura H, Torigoe T, Hirohashi Y, Asanuma H, Inoue R, Nishida S, Tanaka T, Masumori N, Sato N, Tsukamoto T.
  • 雑誌名: Virchows Arch. 巻: 462(1) ページ: 101-7
  • DOI: 10.1007/s00428-012-1343-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prognostic impact of the expression of ALDH1 and SOX2 in urothelial cancer of the upper urinary tract. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kitamura H, Torigoe T, Hirohashi Y, Asanuma H, Inoue R, Nishida S, Tanaka T, Fukuta F, Masumori N, Sato N, Tsukamoto T.
  • 雑誌名: Mod Pathol. 巻: 26(1) ページ: 117-24
  • DOI: 10.1038/modpathol.2012.139
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression and function of FERMT genes in colon carcinoma cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kiriyama K, Hirohashi Y, Torigoe T, Kubo T, Tamura Y, Kanaseki T, Takahashi A, Nakazawa E, Saka E, Ragnarsson C, Nakatsugawa M, Inoda S, Asanuma H, Takasu H, Hasegawa T, Yasoshima T, Hirata K, Sato N.
  • 雑誌名: Anticancer Res. 巻: 33(1) ページ: 167-73
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNA methyltransferase 1 is essential for initiation of the colon cancers. (2013)
  • 著者名/発表者名: Morita R, Hirohashi Y, Suzuki H, Takahashi A, Tamura Y, Kanaseki T, Asanuma H, Inoda S, Kondo T, Hashino S, Hasegawa T, Tokino T, Toyota M, Asaka M, Torigoe T, Sato N.
  • 雑誌名: Exp Mol Pathol. 巻: 94(2) ページ: 322-9
  • DOI: 10.1016/j.yexmp.2012.10.004
  • 査読あり
• [学会発表] がん免疫治療・予防 ―がん幹細胞の免疫制御を介して-
  • 著者名/発表者名: 佐藤昇志
  • 学会等名: 第45回和歌山県医師会医学会総会特別講演
  • 発表場所: 和歌山
  • 招待講演
• [学会発表] 癌免疫
  • 著者名/発表者名: 佐藤昇志
  • 学会等名: 第45回日本小児感染症学会総会・学術集会特別講演
  • 発表場所: 札幌
  • 招待講演
• [学会発表] Human cancer stem cells and natural antigenic peptides
  • 著者名/発表者名: 佐藤昇志
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会シンポジウム
  • 発表場所: 横浜
  • 招待講演
• [学会発表] Immunobiological linkage of human cancer stem cell/cancer-initiating cell with cellular stress response
  • 著者名/発表者名: 佐藤昇志
  • 学会等名: 第86回日本生化学会大会シンポジウム
  • 発表場所: 横浜
  • 招待講演
• [図書] 腫瘍．器官病理学 (2013)
  • 著者名/発表者名: 佐藤昇志、笠原正典編著
  • 総ページ数: 1018
  • 出版者: 南山堂