| 研究概要 |
本研究は、(1)培養細胞やノックアウトマウスなどを用いて、トランスクリプトーム解析等によって年齢依存性転写因子Rhitにより転写制御される遺伝子を検索・同定する。(2) 転写抑制因子 Rhitの遺伝子発現機構を解析し、分子生物学的手法によってその年齢依存性の分子論的基盤を明らかにする。(3) 年齢依存的に発現変動する転写因子遺伝子をプロテオーム解析により網羅的に検索・同定する。の3項目を目的として実施している。平成24年度は、上記項目(1)および(2)について以下の解析を行った。
(1) 年齢依存性転写因子Rhitにより転写制御される遺伝子の検索・同定
i）年齢依存性転写因子Rhitによって転写を制御される遺伝子（標的遺伝子）群もまた年齢依存性生体分子である可能性が高い。そこで、Rhit遺伝子の発現を抑制し、これによって発現量が変動する遺伝子群をPCRアレイ法により検索した。従前の研究により、Rhit/M-LPと酸化ストレスとの関わりが示唆されていることから、今回は酸化ストレス関連遺伝子のアレイを用いて実験を行った。その結果、発現が有意に促進される8遺伝子（Gpx1, Gpx8, Slc38a3など）および発現が有意に抑制される29遺伝子（MPO, Rag2, Aassなど）を同定した。
ii）Rhitのノックアウトマウス作製に取り組みキメラマウスを作製した。
(2) 転写抑制因子 Rhitの遺伝子発現機構の解析
転写抑制因子 Rhitの遺伝子発現機構を明らかにするために、Promotor assay、Gel Shift assay、ChIP assayなどによる詳細な解析を行った結果、Rhit遺伝子の転写促進因子としてGABP、さらに転写抑制因子としてFOXD3を同定した。
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