慢性リンパ性白血病モデルマウスを応用した原因遺伝子の探索

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24659462
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 宮本 敏浩 九州大学, 大学病院, 講師 (70343324)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 慢性リンパ性白血病 / 造血幹細胞 / 白血化機構

研究実績の概要

慢性リンパ球性白血病(CLL)は、高齢者に好発し、加齢とともに有病率が増加する。CLLは、代表的な成熟B細胞性腫瘍であり、腫瘍起源としては基本的に成熟B細胞であると考えられてきた。申請者らは先行研究において、CLL患者の造血幹細胞(HSCs)が免疫不全マウスへの異種移植実験において、CLLの前白血病状態と考えられる異常なoligoclonalな成熟B細胞集団を再構築することを見いだし、CLLの発症機構として、HSCsレベルで何らかの異常が獲得されており、その異常を背景に多段階的にCLLが発症するという新しいCLL発症モデルを提唱した。本研究では、先行研究で提唱されたモデルを遺伝子変異解析により検証するべく、症例特異的な体細胞変異を同定し、体細胞変異群が造血幹細胞レベルに存在しているか否かを検討した。CLL患者よりCLL細胞および、T細胞をFACSにより純化し、T細胞をレファレンスとして次世代シークエンサーによる全エキソンシーケンスを行い、症例特異的な体細胞変異を同定した。同定した体細胞変異のうち、mutant allele frequencyの高いものに関してPCR primerを設計した。FACSによりCD34+CD38- HSCs分画を純化しgDNAを抽出し、設計した変異特異的PCR primerを用いてPCR反応を行い、次世代シークエンサーによるamplicon sequenceを行い、HSCsにおける変異の頻度を測定した。さらに、CLL症例HSCのsingle cell sortingを行い、CFU-assayを行った。14日後にsingle HSC由来の骨髄系コロニーをピックアップし、上記変異特異的PCR primerを用いて変異を有するコロニーの頻度を直接的に計測し、HSCsレベルで実際に体細胞変異が獲得されていることを見いだした。

研究成果

• [雑誌論文] α-Mannan induces Th17-mediated pulmonary graft-versus-host disease in mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Uryu H, Hashimoto D, Kato K, Hayase E, Matsuoka S, Ogasawara R, Takahashi S, Maeda Y, Iwasaki H, Miyamoto T, Saijo S, Iwakura Y, Hill GR, Akashi K, Teshima T
  • 雑誌名: Blood 巻: 未定 ページ: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pre-malignant lymphoid cells arise from hematopoietic stem/progenitor cells in chronic lymphocytic leukemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kikushige Y, Miyamoto T
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: 未定 ページ: 未定
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] CD41 marks the initial myelo-erythroid lineage specification in adult mouse hematopoiesis: redefinition of murine common myeloid progenitor. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyawaki K, Arinobu Y, Iwasaki H, Kohno K, Tsuzuki H, Iino T, Shima T, Kikushige Y, Takenaka K, Miyamoto T, Akashi K.
  • 雑誌名: Stem Cells 巻: 33 ページ: 976-987
  • DOI: 10.1002/stem.1906.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics of patients with development of large granular lymphocyte expansion among dasatinib-treated patients with relapsed Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia after allogeneic stem cell transplantation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ito Y, Miyamoto T, Kamimura T, Aoki K, Henzan H, Aoki T, Shiratsuchi M, Kato K, Nagafuji K, Ogawa R, Eto T, Iwasaki H, Akashi K.
  • 雑誌名: Clin Lymphoma Myeloma Leuk. 巻: 15 ページ: 47-54
  • DOI: 10.1016/j.clml.2014.09.006.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The ordered acquisition of Class II and Class I mutations directs formation of human t(8;21) acute myelogenous leukemia stem cell. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shima T, Miyamoto T, Kikushige Y, Yuda J, Tochigi T, Yoshimoto G, Kato K, Takenaka K, Iwasaki H, Mizuno S, Goto N, Akashi K
  • 雑誌名: Exp Hematol. 巻: 42 ページ: 955-965
  • DOI: 10.1016/j.exphem.2014.07.267.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Hematopoietic stem cell aging and chronic lymphocytic leukemia pathogenesis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kikushige Y, Miyamoto T
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: 100 ページ: 335-340
  • DOI: 10.1007/s12185-014-1651-6.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Combination of bortezomib, thalidomide, and dexamethasone (VTD) as a consolidation therapy after autologous stem cell transplantation for symptomatic multiple myeloma in Japanese patients. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takashima S, Miyamoto T, Kadowaki M, Ito Y, Aoki T, Takase K, Shima T, Yoshimoto G, Kato K, Muta T, Shiratsuchi M, Takenaka K, Iwasaki H, Teshima T, Kamimura T, Akashi K
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: 100 ページ: 159-164
  • DOI: 10.1007/s12185-014-1611-1
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] 造血器腫瘍における治療選択と臨床検査 (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮本敏浩
  • 学会等名: 日本臨床検査医学会学術集会
  • 発表場所: 福岡市
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-25
  • 招待講演
• [学会発表] 骨髄増殖性腫瘍の治療 (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮本敏浩
  • 学会等名: 日本血液学会総会
  • 発表場所: 大阪市
  • 年月日: 2014-11-05 – 2014-11-05
  • 招待講演
• [図書] 白血病診療Q&A 一つ上を行く診療の実践 (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮本敏浩
  • 総ページ数: 10
  • 出版者: 中外医学社
• [図書] 血液疾患最新の治療 2014-2016 (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉本五一、宮本敏浩
  • 総ページ数: 7
  • 出版者: 南江堂
• [備考] 九州大学第一内科ホームページ
  • URL: http://www.1nai.med.kyushu-u.ac.jp