卵巣癌細胞株を用いた人工抗原提示細胞による新規腫瘍抗原の同定

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24659727
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 吉川 史隆 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40224985)
• 研究分担者: 鈴木 史朗 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (20612758) ; 柴田 清住 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90335026)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 卵巣癌 / 腫瘍免疫

研究実績の概要

HLA-A*24:02陰性の卵巣明細胞腺癌細胞株TOV-21Gを基に、内因性HLA発現をsiRNAによって抑制しHLA-A*24:02のみを発現した人工抗原提示細胞（aAPC）を作製した。
HLA-A*24:02陽性健常人の末梢血ナイーブCD8陽性T細胞とaAPCを共培養してCTL linesを誘導し、さらに限界希釈法で複数のCTLクローンを樹立した。
樹立されたCTLクローンのなかからaAPCを傷害し、正常細胞を傷害しないクローンを選別した。
aAPCに用いたTOV-21GのmRNAからcDNAライブラリーを作製して、各プラスミドをHLA-A*24:02導入HEK-293T細胞(HLA-A*02:01, HLA-B*07:02, HLA-Cw*07:02）にトランスフェクションした後にCTLクローンと共培養した。同培養上清中のIFN-γを指標に標的遺伝子を探索し、遺伝子短縮法や合成ペプチドを用いてエピトープペプチドを決定した。
複数の卵巣明細胞腺癌細胞株を認識することができたCTLクローンAの解析から同定された抗原Claudin-1（CLDN1）については、エピトープペプチド（RYEFGQALF）の同定まで行うことができた。クローンBの解析からは標的とする抗原としてRNA binding motif protein 4(RBM4)を同定しエピトープペプチド（VRTPYMSY）を決定したが、このペプチドはHEK-293T細胞に導入したHLA-A*24:02ではなく、元来保有するHLA-Cw*07:02によって提示されていることが確認された。誘導に用いたドナーはHLA-Cw*07:02を保有しておらず、クローンB はHLA-A*24:02拘束性に抗原X（同定未）を認識することに加えて、交差反応性にHLA-Cw*07:02上に提示されているアロ抗原であるRBM4由来ペプチドも認識していると考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] Oncologic outcome after recurrence in patients with stage I epithelial ovarian cancer: are clear-cell and mucinous histological types a different entities? (2014)
  • 著者名/発表者名: Kajiyama H, Mizuno M, Shibata K, Umezu T, Suzuki S, Yamamoto E, Mitsui H, Sekiya R, Niimi K, Kawai M, Nagasaka T, Kikkawa F.
  • 雑誌名: Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 巻: 181 ページ: 305-310
  • DOI: 10.1016/j
  • 査読あり
• [雑誌論文] GPC3 expression in mouse ovarian cancer induces GPC3-specific T cell-mediated immune response through M1 macrophages and suppresses tumor growth. (2014)
  • 著者名/発表者名: Luo C, Shibata K, Suzuki S, Kajiyama H, Senga T, Koya Y, Daimon M, Yamashita M, Kikkawa F.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 巻: 9 ページ: 3-6
  • DOI: 10.3892/or.2014.3300
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinicopathologic features of epithelial ovarian carcinoma in younger vs. older patients: analysis in Japanese women. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshikawa N, Kajiyama H, Mizuno M, Shibata K, Kawai M, Nagasaka T, Kikkawa F.
  • 雑誌名: J Gynecol Oncol. 巻: 25(2) ページ: 118-123
  • DOI: 10.3802/jgo.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Possible association between stem-like hallmark and radioresistance in human cervical carcinoma cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kumazawa S, Kajiyama H, Umezu T, Mizuno M, Suzuki S, Yamamoto E, Mitsui H, Sekiya R, Shibata K, Kikkawa F.
  • 雑誌名: J Obstet Gynaecol Res. 巻: 40(5) ページ: 1389-1398
  • DOI: 10.1111/jog.
  • 査読あり
• [雑誌論文] PLAGL2 regulates actin cytoskeletal architecture and cell migration. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sekiya R, Maeda M, Yuan H, Asano E, Hyodo T, Hasegawa H, Ito S, Shibata K, Hamaguchi M, Kikkawa F, Kajiyama H, Senga T.
  • 雑誌名: Carcinogenesis. 巻: 35(9) ページ: 1993-2001
  • DOI: 10.1093/carcin/bgu081.
  • 査読あり
• [学会発表] CLINICAL AND IMMUNOLOGICAL ANALYSIS IN CLINICAL STUDY OF GLYPICAN-3 PEPTIDE VACCINE FOR PATIENTS WITH OVARIAN CLEAR CELL CARCINOMA IN FIRST CLINICAL REMISSION (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木史朗, 三井寛子, 関谷龍一郎, 水野美香, 梶山広明, 柴田清住, 吉川史隆
  • 学会等名: The 15th Biennial Meeting of the International Gynecologic Cancer Society (IGCS 2014)
  • 発表場所: Melbourne（Australia）
  • 年月日: 2014-11-08 – 2014-11-11
• [学会発表] 卵巣明細胞腺癌に対する寛解維持Glypican-3 ペプチドワクチン療法の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木史朗, 柴田清住, 三井寛子, 関谷龍一郎, 水野美香, 梶山広明, 吉川史隆, 中面哲也
  • 学会等名: 第56回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • 発表場所: 栃木県総合文化センター(栃木県宇都宮市）
  • 年月日: 2014-07-17 – 2014-07-19
• [学会発表] 臨床的寛解が得られた卵巣明細胞腺癌に対するGlypican-3ペプチドワクチン療法の臨床的・免疫学的検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木史朗, 柴田清住, 関谷龍一郎, 三井 寛子, 梅津朋和, 水野美香, 梶山広明, 吉川史隆
  • 学会等名: 第66回日本産科婦人科学会学術講演会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム(東京都千代田区）
  • 年月日: 2014-04-18 – 2014-04-20