2012 年度実施状況報告書

ヌクレオフォスミン：新規生体危険信号因子としての免疫活性化能の解析

研究課題

研究課題/領域番号	24659804
研究機関	大阪工業大学
研究代表者	川原幸一大阪工業大学, 工学部, 教授 (10381170)
研究分担者	丸山征郎鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 特任教授 (20082282) 橋口照人鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (70250917) 伊藤隆史鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 特任講師 (20381171)
研究期間 (年度)	2012-04-01 – 2014-03-31
キーワード	敗血症
研究概要	申請者らは、世界に先駆けて核タンパク質であるヌクレオフォスミン(以下NPM)が外来異物の侵入、そして、それに伴う炎症を察知し、生体に知らせる「生体危険信号因子(アラーミン)」であることを示唆する発表を行っている。NPM は、本来、細胞内では核の中心体に存在し細胞周期に必須である。一度、生体侵襲により NPM が、細胞外へ放出されると、サイトカイン産生を惹起する。アラーミンで最も有名な High Mobility Group Box-1 (HMGB1)は、遊走能のみでサイトカイン産生能は、他の分子との結合によると言われている。故に、NPM は、全くタイプの違うアラーミンである。しかし、NPM のアラーミンとしての機能及び、NPM の受容体に関する報告は皆無である。従って、本研究の目的は、アラーミンとしてのNPMの解析を行うことである。本年度は、NPM の免疫の活性化能を行った。具体的には、マウスマクロファージ様RAW264.7細胞を用いファゴサイトーシス能を検討した。あらかじめNPMをRAW264.7細胞に刺激を行い、その後、蛍光標識のFITCをラベルしたイムノグロブリンを添加した。FITCラベルのイムノグロブリンのファゴサイトーシス能は、フローサイトメトリー法により解析を行った。その結果、NPMの濃度依存的にRAW264.7細胞のファゴサイトーシス能が見られた。よって、NPMは、アラーミンである可能性が示唆された。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由本研究の目的は、細胞の核内に本来は存在しているヌクレオフォスミン（以下NPM）が新規のアラーミンであることを証明することである。アラーミンには５つの定義がある。それは、１．内在性の因子、２．迅速な細胞外への放出、３．恒常性の機能維持、４．受容体、５．免疫の活性化である。この５つの内、すでに１，２，３は証明してきた。よって、今後証明が必要なものは、４．受容体、５．の免疫の活性化のみである。本年度の研究結果は、ファゴサイトーシス能がNPM刺激により活性化されたことより、NPMは、アラーミンであることが強く示唆された。よって、本年度は、おおむね順調に進展していると考えられる。
今後の研究の推進方策	本年度の研究結果より、ヌクレオフォスミン（以下NPM）は、アラーミンであることが示唆された。しかしながら、NPMの受容体の同定などが未だ解明されていない。よって、今後は、NPMの受容体の同定を中心に、さらには、NPMとの結合阻害剤の探索を行なっていく予定である。
次年度の研究費の使用計画	次年度に多少高額な試薬を購入することになったため、今年度の執行を抑制した。次年度は、この繰越額とあわせて、細胞培養、フローサイトメトリー法の試薬、タンパク質検出（ウェスタンブロット法）などを行うための物品購入を行う予定である。また、研究成果の発表、研究打ち合わせのための旅費も使用予定である。